Pāriet uz saturu
CERV-186
Audums
Dzemdes kakls
Slimība
Plakanšūnu karcinoma
Sinonīmi
Cerv-186, MRI-H-186, MRI-H186

Dokumenti

CERV-186

Cell line · Preces numurs 300290

The CERV-186 cell line, derived in vitro from the xenotransplant of cervical carcinoma MRI-H-186, serves as a biological model for invasive, large-cell, n...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

CERV-186 šūnu līnija, kas iegūta in vitro no dzemdes kakla kakla karcinomas MRI-H-186 ksenotransplantāta, kalpo kā invazīvas, lielšūnu, nekeratinizējošas plakanšūnu karcinomas bioloģiskais modelis. Šī šūnu līnija tika izveidota un pielāgota in vivo transplantācijai Dr. Bodgen vadībā Mason Research Institute. MRI-H186 raksturo tās genomiskās īpašības - tā satur aptuveni 26 integrētas gan HPV16 genoma pilna garuma, gan saīsinātu formu kopijas, kas būtiski ietekmē tās transkriptomisko profilu.

MRI-H186 šūnas izceļas ar spēcīgu gan pilna garuma, gan saīsinātu agrīno HPV16 transkriptu ekspresiju, jo īpaši ar augstu E5 pilna garuma (fl) RNS līmeni. Šis transkripcijas raksturs ievērojami atšķiras no citu dzemdes kakla kakla karcinomas šūnu līniju, piemēram, CaSki un MRI-H196, transkripcijas. Turklāt MRI-H186 transkripcijas aktivitāte dažādu citu transkriptu ekspresijas ziņā ir tuva modeļiem, kas novēroti HPK-IA un C3 šūnu līnijās, norādot uz līdzīgu transkripcijas uzvedību visos šajos modeļos. Gan pilna garuma, gan saīsinātu HPV16 genoma integrāciju klātbūtne MRI-H186 šūnās ir galvenais faktors, kas nosaka to agrīno vīrusa transkriptu intensīvo ekspresiju, ko īpaši uzsver ievērojamā E5 fl RNS ekspresija. Šī intensīvā transkripcijas aktivitāte kulminē pie agrīnā poliadenilācijas signāla, uzsverot unikālo transkripcijas dinamiku MRI-H186 šūnu līnijā.

Audums
Dzemdes kakls
Slimība
Plakanšūnu karcinoma
Sinonīmi
  • Cerv-186
  • MRI-H-186
  • MRI-H186

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
2

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs
Tumorogēns
Jā, kailām pelēm

04Identifikatori

Atsauce
CERV-186 (Cytion kataloga numurs 300290)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_5720

05Pazīmes un uzņēmība

Vīrusi
HPV-16 pozitīvs
Produkti
Citokeratīns 8, 18, vimentīns, desmoplakīns

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glikozes, w: 2,5 mM L-glutamīna, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM nātrija piruvāta, w: 1,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820400a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
2 x 104 šūnas/cm2 7 dienu laikā izveidos konfluentu monoslāni
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc atkausēšanas izkliedējiet šūnas uz šķīvja ar blīvumu 5 x 104 šūnas/cm2 un ļaujiet šūnām atgūties no sasaldēšanas procesa un pielipt vismaz 24 stundas.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
42 gadi
Etniskā piederība
Āfrikas