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CERV-186
Tecido
Colo do útero
Doença
Carcinoma de células escamosas
Sinónimos
Cerv-186, MRI-H-186, MRI-H186

Documentos

CERV-186

Cell line · Número do produto 300290

The CERV-186 cell line, derived in vitro from the xenotransplant of cervical carcinoma MRI-H-186, serves as a biological model for invasive, large-cell, n...

€800.00sem impostos nem portes de envio
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01Informações gerais

Descrição

A linha de células CERV-186, derivada in vitro do xenotransplante de carcinoma cervical MRI-H-186, serve de modelo biológico para o carcinoma de células escamosas invasivo, de grandes células e não queratinizante. Esta linha celular foi estabelecida e adaptada para transplante in vivo sob a direção do Dr. Bodgen no Mason Research Institute. Caracterizada pelas suas propriedades genómicas, a MRI-H186 contém aproximadamente 26 cópias integradas de formas completas e truncadas do genoma do HPV16, que influenciam significativamente o seu perfil transcriptómico.

As células MRI-H186 distinguem-se pela sua expressão robusta de transcrições iniciais do HPV16, tanto completas como truncadas, apresentando nomeadamente níveis elevados de ARN E5 completo (fl). Esta assinatura transcricional é notavelmente distinta da observada noutras linhas celulares de carcinoma cervical, como CaSki e MRI-H196. Além disso, a atividade transcricional da MRI-H186, em termos da expressão de vários outros transcritos, apresenta um alinhamento próximo com os padrões observados nas linhas celulares HPK-IA e C3, indicando um comportamento transcricional semelhante nestes modelos. A presença de integrações genómicas de HPV16, tanto completas como truncadas, nas células MRI-H186 é um fator-chave na sua expressão vigorosa de transcritos virais iniciais, particularmente sublinhada pela expressão significativa de RNA fl E5. Esta intensa atividade transcricional culmina no sinal de poliadenilação precoce, realçando a dinâmica transcricional única na linha celular MRI-H186.

Tecido
Colo do útero
Doença
Carcinoma de células escamosas
Sinónimos
  • Cerv-186
  • MRI-H-186
  • MRI-H186

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
2

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tumorigénico
Sim, em ratinhos nus

04Identificadores

Referência
CERV-186 (número de catálogo Cytion 300290)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_5720

05Expressão e suscetibilidade

Vírus
HPV-16 positivo
Produtos
Citoqueratina 8, 18, Vimentina, Desmoplaquina

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM:Ham's F12 (1:1), com: 3,1 g/L de glucose, com: 2,5 mM de L-Glutamina, com: 15 mM de HEPES, com: 0,5 mM de piruvato de sódio, com: 1,2 g/L de NaHCO3 (número de artigo Cytion 820400a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
2 x 104 células/cm² resultarão numa monocamada confluente em 7 dias
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Após o descongelamento, coloque as células em placas a uma densidade de 5 x 104 células/cm² e deixe-as recuperar do processo de congelamento e aderir durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
42 anos
Etnia
Africano