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CERV-186
Gewebe
Gebärmutterhals
Krankheit
Plattenepithelkarzinom
Synonyme
Cerv-186, MRI-H-186, MRI-H186

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CERV-186

Cell line · Artikelnummer 300290

The CERV-186 cell line, derived in vitro from the xenotransplant of cervical carcinoma MRI-H-186, serves as a biological model for invasive, large-cell, n...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die Zelllinie CERV-186, die in vitro aus dem Xenotransplantat des Gebärmutterhalskrebses MRI-H-186 gewonnen wurde, dient als biologisches Modell für invasive, großzellige, nicht-verhornende Plattenepithelkarzinome. Diese Zelllinie wurde unter der Leitung von Dr. Bodgen am Mason Research Institute etabliert und für die In-vivo-Transplantation angepasst. MRI-H186 zeichnet sich durch seine genomischen Eigenschaften aus und enthält etwa 26 integrierte Kopien des HPV16-Genoms in voller Länge und in verkürzter Form, die das transkriptomische Profil erheblich beeinflussen.

MRI-H186-Zellen zeichnen sich durch eine robuste Expression sowohl von Volllängen- als auch von verkürzten frühen HPV16-Transkripten aus und weisen vor allem hohe Konzentrationen von E5-RNA in voller Länge (fl) auf. Diese Transkriptionssignatur unterscheidet sich deutlich von derjenigen, die in anderen Gebärmutterhalskrebs-Zelllinien wie CaSki und MRI-H196 beobachtet wird. Darüber hinaus zeigt die Transkriptionsaktivität von MRI-H186 in Bezug auf die Expression verschiedener anderer Transkripte eine enge Übereinstimmung mit den Mustern, die in den HPK-IA- und C3-Zelllinien beobachtet wurden, was auf ein ähnliches Transkriptionsverhalten in diesen Modellen hindeutet. Das Vorhandensein von genomischen Integrationen von HPV16 in voller Länge und in verkürzter Form in MRI-H186-Zellen ist ein Schlüsselfaktor für die starke Expression früher viraler Transkripte, was insbesondere durch die signifikante Expression der E5 fl RNA unterstrichen wird. Diese intensive Transkriptionsaktivität kulminiert am frühen Polyadenylierungssignal und unterstreicht die einzigartige Transkriptionsdynamik innerhalb der MRI-H186-Zelllinie.

Gewebe
Gebärmutterhals
Krankheit
Plattenepithelkarzinom
Synonyme
  • Cerv-186
  • MRI-H-186
  • MRI-H186

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
2

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Tumorauslösend
Ja, in Nacktmäusen

04Bezeichner

Quellenangabe
CERV-186 (Cytion Katalognummer 300290)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_5720

05Expression und Anfälligkeit

Viren
HPV-16 positiv
Produkte
Cytokeratin 8, 18, Vimentin, Desmoplakin

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glucose, w: 2,5 mM L-Glutamin, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM Natriumpyruvat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820400a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
2 x 104 Zellen/cm² führen innerhalb von 7 Tagen zu einer konfluenten Monoschicht.
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Nach dem Auftauen die Zellen mit einer Dichte von 5 x 104 Zellen/cm² ausplattieren und die Zellen mindestens 24 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und adhärieren lassen.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
42 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Afrika