Mine otse sisu juurde
CERV-186
Kude
Emakakael
Haigus
Rakk-kartsinoom
Sünonüümid
Cerv-186, MRI-H-186, MRI-H186

Dokumendid

CERV-186

Cell line · Toote number 300290

The CERV-186 cell line, derived in vitro from the xenotransplant of cervical carcinoma MRI-H-186, serves as a biological model for invasive, large-cell, n...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
1

01Üldine teave

Kirjeldus

CERV-186 rakuliin, mis on saadud in vitro emakakaelavähi ksenotransplantatsioonist MRI-H-186, on invasiivse, suurrakulise, mittekeratiniseeriva plaatinoosse rakukartsinoomi bioloogiline mudel. See rakuliin loodi ja kohandati in vivo siirdamiseks dr Bodgeni juhtimisel Masoni uurimisinstituudis. MRI-H186 iseloomustab oma genoomseid omadusi: see sisaldab ligikaudu 26 integreeritud koopiat nii HPV16 genoomi täispikkusest kui ka kärbitud vormidest, mis mõjutavad oluliselt selle transkriptoomilist profiili.

MRI-H186 rakke iseloomustab nii täispikkuses kui ka kärbitud varajase HPV16 transkriptide jõuline ekspressioon, eelkõige E5 täispika (fl) RNA kõrge sisaldus. See transkriptsioonisignatuur erineb märkimisväärselt teistest emakakaela kartsinoomi rakuliinidest, nagu CaSki ja MRI-H196. Lisaks sellele on MRI-H186 transkriptsiooniline aktiivsus erinevate teiste transkriptide ekspressiooni osas tihedalt kooskõlas HPK-IA ja C3 rakuliinides täheldatud mustritega, mis näitab sarnast transkriptsioonilist käitumist nendes mudelites. Nii täispikkuses kui ka kärbitud HPV16 genoomsete integratsioonide olemasolu MRI-H186 rakkudes on võtmeteguriks nende varajaste viiruse transkriptide jõulises ekspressioonis, mida eriti rõhutab E5 fl RNA märkimisväärne ekspressioon. See intensiivne transkriptsiooniline aktiivsus kulmineerub varajase polüadenüülimise signaali juures, mis rõhutab ainulaadset transkriptsioonidünaamikat MRI-H186 rakuliinis.

Kude
Emakakael
Haigus
Rakk-kartsinoom
Sünonüümid
  • Cerv-186
  • MRI-H-186
  • MRI-H186

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
2

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed
Tuumorigeenne
Jah, alasti hiirtel

04Tunnused

Viide
CERV-186 (Cytioni katalooginumber 300290)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_5720

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Viirused
HPV-16 positiivne
Tooted
Tsütokeratiin 8, 18, vimentiin, desmoplakiin

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glükoosi, w: 2,5 mM L-glutamiini, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM naatriumpüruvaati, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820400a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
2 x 104 rakku/cm2 annab 7 päeva jooksul tulemuseks konfluentse monokihi.
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Taastumine pärast sulamist
Pärast sulatamist asetage rakud plaadile tihedusega 5 x 104 rakku/cm2 ja laske rakkudel külmutamisprotsessist taastuda ja kinnituda vähemalt 24 tunni jooksul.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
42 aastat
Etniline kuuluvus
Aafrika