Skip to content
CERV-186
Tissue
Cổ tử cung
Disease
Ung thư biểu mô vảy
Synonyms
Cerv-186, MRI-H-186, MRI-H186

Documents

CERV-186

Cell line · Product number 300290

The CERV-186 cell line, derived in vitro from the xenotransplant of cervical carcinoma MRI-H-186, serves as a biological model for invasive, large-cell, n...

€800.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
1

01General information

Description

Dòng tế bào CERV-186, được tạo ra in vitro từ quá trình ghép mô ngoại loài của ung thư cổ tử cung MRI-H-186, được sử dụng làm mô hình sinh học cho ung thư biểu mô vảy không sừng hóa, tế bào lớn, xâm lấn. Dòng tế bào này được thiết lập và thích nghi cho ghép mô in vivo dưới sự hướng dẫn của Tiến sĩ Bodgen tại Viện Nghiên cứu Mason. Với đặc điểm di truyền của mình, MRI-H186 chứa khoảng 26 bản sao tích hợp của cả dạng toàn bộ và dạng bị cắt ngắn của bộ gen HPV16, điều này ảnh hưởng đáng kể đến hồ sơ chuyển mã của nó.

Tế bào MRI-H186 được phân biệt bởi sự biểu hiện mạnh mẽ của cả các bản sao đầy đủ và bị cắt ngắn của các bản sao sớm HPV16, đặc biệt là mức độ cao của RNA E5 đầy đủ (fl). Dấu ấn biểu hiện gen này rõ ràng khác biệt so với những gì quan sát được trong các dòng tế bào ung thư cổ tử cung khác như CaSki và MRI-H196. Ngoài ra, hoạt động biểu hiện của MRI-H186, về mặt biểu hiện của các bản sao khác, cho thấy sự tương đồng chặt chẽ với các mẫu quan sát được trong các dòng tế bào HPK-IA và C3, cho thấy hành vi biểu hiện tương tự giữa các mô hình này. Sự hiện diện của cả các tích hợp gen HPV16 đầy đủ và bị cắt ngắn trong tế bào MRI-H186 là yếu tố quan trọng trong việc biểu hiện mạnh mẽ các bản sao RNA virus giai đoạn sớm, đặc biệt được nhấn mạnh bởi mức biểu hiện đáng kể của RNA E5 fl. Hoạt động phiên mã mạnh mẽ này đạt đỉnh tại tín hiệu polyadenylation giai đoạn sớm, nhấn mạnh động học phiên mã độc đáo trong dòng tế bào MRI-H186.

Tissue
Cổ tử cung
Disease
Ung thư biểu mô vảy
Synonyms
  • Cerv-186
  • MRI-H-186
  • MRI-H186

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
Biosafety level
2

03Characteristics

Morphology
Tương tự biểu mô
Tumourigenic
Đúng vậy, ở chuột nude

04Identifiers

Citation
CERV-186 (Số catalog Cytion 300290)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_5720

05Expression and susceptibility

Viruses
Dương tính với HPV-16
Products
Cytokeratin 8, 18, Vimentin, Desmoplakin

06Handling and culture

Culture medium
DMEM:Ham's F12 (tỷ lệ 1:1), chứa: 3,1 g/L glucose, chứa: 2,5 mM L-glutamine, chứa: 15 mM HEPES, chứa: 0,5 mM natri pyruvate, chứa: 1,2 g/L NaHCO₃ (Số hiệu sản phẩm Cytion 820400a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO₂, môi trường ẩm.

Supplements
Bổ sung 10% huyết thanh bò phôi (FBS) vào môi trường nuôi cấy
Dissociation reagent
Accutase
Subculturing
Loại bỏ môi trường nuôi cấy cũ khỏi các tế bào bám dính và rửa chúng bằng PBS không chứa canxi và magiê. Đối với bình T25, sử dụng 3-5 ml PBS, và đối với bình T75, sử dụng 5-10 ml. Sau đó, phủ hoàn toàn các tế bào bằng Accutase, sử dụng 1-2 ml cho bình T25 và 2,5 ml cho bình T75. Để tế bào ủ ở nhiệt độ phòng trong 8-10 phút để tách chúng ra. Sau khi ủ, nhẹ nhàng trộn tế bào với 10 ml môi trường để tái phân tán chúng, sau đó ly tâm ở 300xg trong 3 phút. Loại bỏ dịch trên, tái phân tán tế bào trong môi trường tươi và chuyển chúng vào các bình mới đã chứa môi trường tươi.
Seeding density
2 x 10⁴ tế bào/cm² sẽ tạo thành một lớp đơn liên tục trong vòng 7 ngày.
Fluid renewal
2 đến 3 lần mỗi tuần
Post-thaw recovery
Sau khi rã đông, cấy tế bào với mật độ 5 x 10⁴ tế bào/cm² và để tế bào phục hồi sau quá trình đông lạnh và bám dính ít nhất 24 giờ.
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

Sự nhiễm khuẩn Mycoplasma được loại trừ bằng cả các phương pháp xét nghiệm dựa trên PCR và các phương pháp phát hiện Mycoplasma dựa trên phát quang.

Để đảm bảo không có nhiễm khuẩn vi khuẩn, nấm hoặc men, các mẫu nuôi cấy tế bào được kiểm tra trực quan hàng ngày.

Freeze medium
Như một môi trường bảo quản đông lạnh, chúng tôi sử dụng môi trường tăng trưởng hoàn chỉnh (bao gồm FBS) + 10% DMSO để đảm bảo độ sống sau khi rã đông, hoặc CM-1 (mã sản phẩm Cytion 800100), bao gồm các chất bảo vệ thẩm thấu và chất ổn định chuyển hóa được tối ưu hóa để cải thiện quá trình phục hồi và giảm stress do đông lạnh gây ra.
Storage conditions

Để bảo quản lâu dài, hãy đặt ống nghiệm vào nitơ lỏng ở pha hơi ở nhiệt độ khoảng −150 đến −196 °C. Việc bảo quản ở −80 °C chỉ được chấp nhận như một bước trung gian ngắn hạn trước khi chuyển sang nitơ lỏng.

Shipping conditions

Các dòng tế bào được bảo quản bằng phương pháp đông lạnh được vận chuyển trên đá khô trong bao bì cách nhiệt đã được kiểm định, kèm theo lượng chất làm lạnh đủ để duy trì nhiệt độ khoảng −78 °C trong suốt quá trình vận chuyển. Khi nhận hàng, hãy kiểm tra ngay lập tức bao bì và chuyển các ống nghiệm sang nơi lưu trữ phù hợp mà không chậm trễ.

08Donor

Donor age
42 năm
Ethnicity
Châu Phi