Přejít na obsah
CERV-186
Tkáň
Cervix
Nemoc
Dlaždicobuněčný karcinom
Synonyma
Cerv-186, MRI-H-186, MRI-H186

Dokumenty

CERV-186

Cell line · Číslo výrobku 300290

The CERV-186 cell line, derived in vitro from the xenotransplant of cervical carcinoma MRI-H-186, serves as a biological model for invasive, large-cell, n...

€800.00bez DPH a poštovného
Skladem
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
1

01Obecné informace

Popis

Buněčná linie CERV-186, odvozená in vitro z xenotransplantátu karcinomu děložního hrdla MRI-H-186, slouží jako biologický model invazivního velkobuněčného nekeratinizujícího dlaždicobuněčného karcinomu. Tato buněčná linie byla vytvořena a upravena pro transplantaci in vivo pod vedením Dr. Bodgena v Masonově výzkumném ústavu. MRI-H186, charakterizovaná svými genomickými vlastnostmi, obsahuje přibližně 26 integrovaných kopií jak plných, tak zkrácených forem genomu HPV16, které významně ovlivňují její transkriptomický profil.

Buňky MRI-H186 se vyznačují silnou expresí časných transkriptů HPV16 plné i zkrácené délky, zejména vykazují vysoké hladiny RNA plné délky E5 (fl). Tento transkripční znak se výrazně liší od znaků pozorovaných u jiných buněčných linií karcinomu děložního hrdla, jako jsou CaSki a MRI-H196. Kromě toho transkripční aktivita MRI-H186, pokud jde o expresi různých dalších transkriptů, vykazuje blízkou shodu se vzorci pozorovanými u buněčných linií HPK-IA a C3, což naznačuje podobné transkripční chování u těchto modelů. Přítomnost genomických integrací HPV16 v plné délce i zkrácených genomů v buňkách MRI-H186 je klíčovým faktorem jejich intenzivní exprese časných virových transkriptů, což podtrhuje zejména významná exprese fl RNA E5. Tato intenzivní transkripční aktivita kulminuje u časného polyadenylačního signálu, což zdůrazňuje jedinečnou transkripční dynamiku v buněčné linii MRI-H186.

Tkáň
Cervix
Nemoc
Dlaždicobuněčný karcinom
Synonyma
  • Cerv-186
  • MRI-H-186
  • MRI-H186

02Klasifikace

Organismus
Člověk
Sex
Žena
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Úroveň biologické bezpečnosti
2

03Charakteristika

Morfologie
Epitelu podobné
Tumorogenní
Ano, u nahých myší

04Identifikátory

Citace
CERV-186 (katalogové číslo Cytion 300290)
Daňové identifikační číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_5720

05Exprese a náchylnost

Viry
HPV-16 pozitivní
Produkty
Cytokeratin 8, 18, Vimentin, Desmoplakin

06Manipulace a chov

Pěstovací médium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glukózy, w: 2,5 mM L-Glutaminu, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM pyruvátu sodného, w: 1,2 g/l NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820400a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 10% FBS
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Hustota výsevu
2 x 104 buněk/cm2 vytvoří konfluentní monovrstvu do 7 dnů.
Obnova tekutin
2 až 3krát týdně
Zotavení po rozmrazení
Po rozmrazení naneste buňky v množství 5 x 104 buněk/cm2 a nechte je alespoň 24 hodin zotavit se z procesu zmrazení a přilnout.
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

08Dárce

Věk dárce
42 let
Etnická příslušnost
Africké