Pereiti prie turinio
HCC366
Audinys
Plaučiai
Liga
Nesmulkialąstelinis plaučių vėžys
Metastazių vieta
Piktybinis pleuros skysčio susikaupimas (mėginio paėmimo vieta)
Sinonimai
HCC-366, HCC0366, Hamon Cancer Center 366

Dokumentai

HCC366

Cell line · Prekės numeris 302155

HCC366 is a human lung adenosquamous carcinoma cell line established from the malignant pleural effusion of an 80-year-old European female patient at the ...

€430.00neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

Pritaikymas / Rekomendacijos

Yra sandėlyje
Lot
Rekomenduojama (šviežiausia partija)
  • CoA
1

01Bendra informacija

Aprašymas

HCC366 – tai žmogaus plaučių adenoskvamozinės karcinomos ląstelių linija, išskirta iš 80-metės europietės pacientės piktybinio pleuros išsiliejimo Hamon vėžio centre, priklausančiame UT Southwestern medicinos centrui. Adenoskvamozinė karcinoma yra retas mišrus neplaučių smulkiųjų ląstelių vėžio (NSCLC) histologinis potipis, kuriame dera tiek adenokarcinomos, tiek skvamozinės ląstelių karcinomos požymiai. HCC366 yra įtraukta į „Cancer Dependency Map“ (DepMap), CCLE, COSMIC ląstelių linijų ir MD Anderson ląstelių linijų projekto rinkinius. Ši linija turi homozigotinę TP53 p.Tyr220Cys mutaciją (DNR-siejančio domeno struktūrinę mutaciją) ir heterozigotinę ATM p.Pro534Ala mutaciją. Ji neturi KRAS, EGFR ar STK11 „vairuotojų“ mutacijų ir pasižymi mikrosatelitų stabilumu (MSS). Ląstelių dauginimosi laikas yra maždaug 60–70 valandų.

HCC366 tinka naudoti neplaučių smulkiųjų ląstelių vėžio (NSCLC) tyrimuose, ypač plaučių adenoskvamozinės karcinomos biologijos tyrimuose, kurie, palyginti su grynosios adenokarcinomos ar skvamozinės ląstelių karcinomos potipiais, vis dar yra nepakankamai ištirti. Pagrindinės taikymo sritys apima: TP53 funkcijos sustiprinimo mutacijų tyrimus; ATM reguliuojamą DNR pažeidimų atsaką; jautrumo chemoterapijai ir atsparumo jai tyrimus (cisplatina, paklitakselis, gemcitabinas); tikslinio veikimo vaistų vertinimą; vaistų jautrumo profiliavimą naudojant „DepMap“ ir „CCLE“ sistemas; mišrios histologijos NSCLC biomarkerių atradimą; lyginamąją genomiką; bei proteomikos ir transkriptomikos profiliavimą. HCC366 taip pat prisidėjo prie plaučių vėžio ląstelių biologijos tyrimų, įskaitant proliferacijos, migracijos ir invazijos mechanizmus, susijusius su piktybinėmis pleuros ligomis.

Audinys
Plaučiai
Liga
Nesmulkialąstelinis plaučių vėžys
Metastazių vieta
Piktybinis pleuros skysčio susikaupimas (mėginio paėmimo vieta)
Paraiškos
NSCLC tyrimai; plaučių adenoskvamozinės karcinomos biologija; TP53 p.Tyr220Cys funkcijos sustiprėjimo tyrimai; ATM reakcija į DNR pažeidimus; jautrumas chemoterapijai (cisplatina, paklitakselis, gemcitabinas); DepMap/CCLE vaistų jautrumo profiliavimas; biomarkerių atradimas; NSCLC lyginamoji genomika; piktybinių pleuros ligų biologija
Sinonimai
  • HCC-366
  • HCC0366
  • Hamon Cancer Center 366

02Klasifikacija

Organizmas
Žmogus
Seksas
Moteris
Augimo savybės
Prisijungęs
GMO statusas
Be GMO
Išsami informacija apie GMO statusą
No genetic modification; wildtype NSCLC cell line with endogenous somatic mutations (TP53 p.Tyr220Cys homozygous; ATM p.Pro534Ala heterozygous)
Biologinio saugumo lygis
1

03Charakteristikos

Morfologija
Į epitelį panašus
Ląstelių tipas
Epitelio ląstelės
MSI būsena
MSS
Laikas, per kurį skaičius padvigubėja
maždaug 60–70 valandų

04Identifikatoriai

Nuoroda
HCC366 (Cytion katalogo numeris 302155)
NCBI mokesčių identifikavimo kodas
9606
Cellosaurus
CVCL_2059

05Išraiška ir jautrumas

Mutacijų profilis
TP53 p.Tyr220Cys (c.659A>G) homozigotinis; ATM p.Pro534Ala (c.1600C>G) heterozigotinis

06Laikymas ir auginimas

Maitinamoji terpė
RPMI 1640, š: 2,0 mM stabilus glutaminas, š: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion gaminio numeris 820700a)
Inkubacijos aplinka

37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje.

Maisto papildai
Papildykite terpę 10 % termiškai inaktyvuoto FBS
Disociacijos reagentas
Accutase
Subkultūrinis auginimas
Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė.
Skaidymo santykis
1–5
Sėjos tankis
nuo 1 iki 3 × 10⁴ ląstelių/cm²
Skysčių atnaujinimas
2-3 kartus per savaitę
Atkūrimas po atšilimo
Atšildžius, ląsteles išsėkite į lėkšteles, išlaikydami tankį 5 × 10⁴ ląstelių/cm², ir prieš pirmąjį terpės keitimą palaukite mažiausiai 24 valandas, kol ląstelės prisitvirtins.
Atšildymas ir auginimas
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kokybės kontrolė ir kriokonservavimas

Sterilumas

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Šaldymo terpė
Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Laikymo sąlygos

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Pristatymo sąlygos

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

08Donoras

Donoro amžius
80 metų
Etninė priklausomybė
Europos