Pāriet uz saturu
HCC366
Audums
Plaušas
Slimība
Nesmalto šūnu plaušu vēzis
Metastāžu vieta
Ļaundabīgs pleiras izsvīdums (parauga ņemšanas vieta)
Sinonīmi
HCC-366, HCC0366, Hamon Cancer Center 366

Dokumenti

HCC366

Cell line · Preces numurs 302155

HCC366 is a human lung adenosquamous carcinoma cell line established from the malignant pleural effusion of an 80-year-old European female patient at the ...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

HCC366 ir cilvēka plaušu adenoskvamozās karcinomas šūnu līnija, kas izveidota no 80 gadus vecas eiropiešu sievietes pacienta ļaundabīgā pleiras izsvīduma, kas iegūts Hamon Vēža centrā, UT Southwestern Medicīnas centrā. Adenoskvamozā karcinoma ir reta, jaukta histoloģiskā neplaušu mazšūnu vēža (NSCLC) apakštipa forma, kurā apvienojas gan adenokarcinomas, gan plakanšūnu karcinomas pazīmes. HCC366 ir iekļauta Vēža atkarības kartē (DepMap), CCLE, COSMIC šūnu līniju un MD Anderson šūnu līniju projekta paneļos. Šai līnijai piemīt homozigota TP53 p.Tyr220Cys mutācija (DNS saistīšanās domēna strukturāla mutācija) un heterozigota ATM p.Pro534Ala mutācija. Tai nav KRAS, EGFR vai STK11 vadītājmutāciju, un tā uzrāda mikrosatelītu stabilitāti (MSS). Dubultošanās laiks ir aptuveni 60–70 stundas.

HCC366 ir piemērota neplaušu mazšūnu karcinomas (NSCLC) pētījumiem, jo īpaši pētījumos par plaušu adenoskvamozā karcinoma bioloģiju, kas joprojām ir nepietiekami izpētīta salīdzinājumā ar tīra adenokarcinoma vai plakanšūnu karcinoma apakštipiem. Galvenie pielietojumi ietver: TP53 funkcijas pastiprināšanas mutāciju pētījumus; ATM-mediēta DNS bojājumu reakcija; ķīmijterapijas jutības un rezistences testēšana (cisplatīns, paklitakselis, gemcitabīns); mērķtiecīgo zāļu novērtēšana; zāļu jutības profilēšana DepMap un CCLE sistēmās; biomarķieru atklāšana jaukta histoloģiskā NSCLC gadījumos; salīdzinošā genomika; un proteomikas/transkriptomikas profilēšana. HCC366 ir devis ieguldījumu arī plaušu vēža šūnu bioloģijas pētījumos, tostarp pētījumos par proliferāciju, migrāciju un invāzijas mehānismiem, kas saistīti ar ļaundabīgām pleiras slimībām.

Audums
Plaušas
Slimība
Nesmalto šūnu plaušu vēzis
Metastāžu vieta
Ļaundabīgs pleiras izsvīdums (parauga ņemšanas vieta)
Pieteikumi
NSCLC pētījumi; plaušu adenoskvamozās karcinomas bioloģija; TP53 p.Tyr220Cys funkcijas pastiprināšanās pētījumi; ATM DNS bojājumu reakcija; jutība pret ķīmijterapiju (cisplatīns, paklitakselis, gemcitabīns); DepMap/CCLE zāļu jutības profilēšana; biomarķieru atklāšana; NSCLC salīdzinošā genomika; ļaundabīgu pleiras slimību bioloģija
Sinonīmi
  • HCC-366
  • HCC0366
  • Hamon Cancer Center 366

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
Bez ĢMO
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
No genetic modification; wildtype NSCLC cell line with endogenous somatic mutations (TP53 p.Tyr220Cys homozygous; ATM p.Pro534Ala heterozygous)
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs
Šūnu tips
Epitēlija šūnas
MSI statuss
MSS
Laiks, kas nepieciešams, lai skaits dubultojās
aptuveni 60 līdz 70 stundas

04Identifikatori

Atsauce
HCC366 (Cytion kataloga numurs 302155)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_2059

05Pazīmes un uzņēmība

Mutāciju profils
TP53 p.Tyr220Cys (c.659A>G) homozigots; ATM p.Pro534Ala (c.1600C>G) heterozigots

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabils glutamīns, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820700a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% termiski inaktivētu FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sadalījuma attiecība
no 1 līdz 5
Sēšanas blīvums
1 līdz 3 × 10⁴ šūnas/cm²
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc atkausēšanas izsējiet šūnas blīvumā 5 × 10⁴ šūnas/cm² un pirms pirmās barotnes nomaiņas ļaujiet tām vismaz 24 stundas pielipt.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
80 gadi
Etniskā piederība
Eiropas