Siirry sisältöön
HCC366
Kudos
Keuhkot
Sairaus
Ei-pienisoluinen keuhkosyöpä
Metastaasikohde
Pahanlaatuinen keuhkopussin nestekertymä (näytteenottokohta)
Synonyymit
HCC-366, HCC0366, Hamon Cancer Center 366

Asiakirjat

HCC366

Cell line · Tuotenumero 302155

HCC366 is a human lung adenosquamous carcinoma cell line established from the malignant pleural effusion of an 80-year-old European female patient at the ...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

HCC366 on ihmisen keuhkojen adenoskvamøsikarsinooman solulinja, joka on peräisin 80-vuotiaan eurooppalaisen naispotilaan pahanlaatuisesta keuhkopussin nestekertymästä ja joka on perustettu Hamon Cancer Centerissä, UT Southwestern Medical Centerissä. Adenoskvamøsinen karsinooma on harvinainen, histologisesti sekamuotoinen ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC), jossa yhdistyvät sekä adenokarsinooman että levyepiteelikarsinooman piirteet. HCC366 sisältyy Cancer Dependency Map (DepMap)-, CCLE-, COSMIC-solulinja- ja MD Anderson Cell Lines Project -paneeleihin. Kantakudoksessa on homotsygoottinen TP53 p.Tyr220Cys-mutaatio (DNA:han sitoutuvan domeenin rakenteellinen mutaatio) sekä heterotsygoottinen ATM p.Pro534Ala-mutaatio. Siinä ei esiinny KRAS-, EGFR- tai STK11-ajurimutaatioita, ja se on mikrosatelliittivakaa (MSS). Kaksinkertaistumisaika on noin 60–70 tuntia.

HCC366 soveltuu NSCLC-tutkimukseen, erityisesti keuhkojen adenoskvamooksen karsinooman biologian tutkimuksiin, joita on tutkittu suhteellisen vähän verrattuna puhtaisiin adenokarsinooma- tai levyepiteelikarsinooma-alatyyppeihin. Keskeisiä sovelluksia ovat: TP53-geenin funktionaalisen vahvistumisen mutaatiotutkimukset; ATM:n välittämä DNA-vaurion vaste; kemoterapian herkkyys- ja resistenssitestaus (sisplatiini, paklitakseli, gemsitabiini); kohdennettujen lääkeaineiden arviointi; lääkeherkkyysprofiilien määrittäminen DepMap- ja CCLE-kehysten puitteissa; biomarkkerien löytäminen sekahistologiselle NSCLC:lle; vertaileva genomiikka; sekä proteomiikka- ja transkriptomiikkaprofiilien määrittäminen. HCC366 on myös edistänyt keuhkosyövän solubiologian tutkimusta, mukaan lukien pahanlaatuiseen keuhkopussitautiin liittyvät proliferaatio-, migraatio- ja invaasiomekanismit.

Kudos
Keuhkot
Sairaus
Ei-pienisoluinen keuhkosyöpä
Metastaasikohde
Pahanlaatuinen keuhkopussin nestekertymä (näytteenottokohta)
Sovellukset
NSCLC-tutkimus; keuhkojen adenoskvamøsisen karsinooman biologia; TP53 p.Tyr220Cys-geenin toiminnan vahvistumista koskevat tutkimukset; ATM:n DNA-vaurion vaste; kemoterapian herkkyys (sisplatiini, paklitakseli, gemsitabiini); DepMap/CCLE-lääkeherkkyysprofiilointi; biomarkkerien löytäminen; NSCLC:n vertaileva genomiikka; pahanlaatuisten keuhkopussisairauksien biologia
Synonyymit
  • HCC-366
  • HCC0366
  • Hamon Cancer Center 366

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
GMO-status
GMO-vapaa
GMO-statuksen tiedot
No genetic modification; wildtype NSCLC cell line with endogenous somatic mutations (TP53 p.Tyr220Cys homozygous; ATM p.Pro534Ala heterozygous)
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Solutyyppi
Epiteelisolut
MSI-tila
MSS
Kaksinkertaistumisaika
noin 60–70 tuntia

04Tunnisteet

Lähdeviite
HCC366 (Cytionin luettelonumero 302155)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_2059

05Ilmentyminen ja alttius

Mutaatioprofiili
TP53 p.Tyr220Cys (c.659A>G) homotsygoottinen; ATM p.Pro534Ala (c.1600C>G) heterotsygoottinen

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilia glutamiinia, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820700a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 % lämpöinaktivoidulla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Jakosuhde
1–5
Kylvötiheys
1–3 × 10⁴ solua/cm²
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulamisen jälkeinen palautuminen
Sulatuksen jälkeen solut siirretään viljelyastioihin tiheydellä 5 × 10⁴ solua/cm² ja annetaan niiden kiinnittyä vähintään 24 tuntia ennen ensimmäistä elatusaineen vaihtoa.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
80 vuotta
Etnisyys
Eurooppalainen