01General information
- Description
La línea celular PK(15), derivada de la PK-2A —una línea celular establecida en 1955 a partir del riñón de un cerdo adulto—, está infectada con el oncovirus porcino de tipo C (anteriormente conocido como retrovirus endógeno porcino, PERV), el cual está clasificado como un agente del grupo de riesgo 2. El genoma de la célula huésped contiene 62 copias del gen *pol*, que codifica la transcriptasa inversa y otras proteínas.
Inicialmente, las partículas virales producidas por la línea celular PK(15) se describieron como defectuosas y no infecciosas para diversas líneas celulares de mamíferos, incluida una línea celular humana, lo que llevó a su clasificación como línea celular del grupo de riesgo 1. Sin embargo, estudios posteriores demostraron que las células humanas 293 podían infectarse de manera productiva con el sobrenadante libre de células de las células PK(15). Este hallazgo dio lugar a la reclasificación de la línea celular PK(15) por parte de la Comisión Central Alemana para la Seguridad Biológica (ZKBS) en noviembre de 2018.
Los análisis de PCR revelaron que los virus transmitidos pertenecían a los subtipos politrópicos PERV-A y PERV-B. Además, se observó que las partículas virales producidas por las células 293 eran resistentes a la inactivación por parte del sistema del complemento humano.
Además de su importancia virológica, la línea celular PK(15) también sirve como un huésped adecuado para aplicaciones de transfección. Debido a sus propiedades de crecimiento adherente, es de gran valor en diversos entornos de investigación y experimentación.
- Tissue
- Riñón
- Synonyms
- PK(15)
- PK (15)
- PK 15
- PK15
- Porcine Kidney-15
02Classification
- Organism
- Pig
- Sex
- Male
- Growth properties
- Adherent
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- De tipo epitelial
04Identifiers
- Citation
- PK-15 (número de catálogo de Cytion 607426)
- NCBI TaxID
- 9823
- Cellosaurus
- CVCL_2160
05Expression and susceptibility
- Viruses
- Positivo para PCV1 (circovirus porcino 1), negativo para PCV2, negativo para PCV3
- Virus susceptibility
- Cólera porcino, peste porcina africana, exantema vesicular porcino, fiebre aftosa (FMDV), estomatitis vesicular (Indiana), vacuna, reovirus 2 y 3, adenovirus 4 y 5, virus Coxsackie B2, B3, B4, B5 y B6
- Virus resistance
- Poliovirus 2
- Reverse transcriptase
- Positivo
06Handling and culture
- Culture medium
- EMEM (MEM Eagle), con: 2 mM de L-glutamina, con: 2,2 g/L de NaHCO₃, con: EBSS (número de artículo de Cytion 820100a)
- Incubation atmosphere
37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.
- Supplements
- Añade al medio un 10 % de FBS y un 1 % de NEAA
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- Retira el medio usado de las células adheridas y lávalas con PBS sin calcio ni magnesio. Para los frascos T25, usa de 3 a 5 ml de PBS, y para los frascos T75, usa de 5 a 10 ml. Luego, cubra las células por completo con Accutase, utilizando de 1 a 2 ml para los frascos T25 y 2,5 ml para los frascos T75. Deje que las células se incuben a temperatura ambiente durante 8 a 10 minutos para desprenderse. Después de la incubación, mezcla suavemente las células con 10 ml de medio para resuspendarlas; luego, centrifuga a 300xg durante 3 minutos. Deseche el sobrenadante, resuspenda las células en medio fresco y transfiéralas a frascos nuevos que ya contengan medio fresco.
- Seeding density
- 2 × 10⁴ células/cm²
- Fluid renewal
- De 2 a 3 veces por semana
- Post-thaw recovery
- Deja que las células se recuperen del proceso de congelación durante al menos 24 a 48 horas.
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.
Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.
- Freeze medium
- Como medio de criopreservación, utilizamos un medio de crecimiento completo (que incluye FBS) + 10 % de DMSO para garantizar una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo de Cytion 800100), que incluye osmoprotectores y estabilizadores metabólicos optimizados para mejorar la recuperación y reducir el estrés inducido por la criopreservación.
- Storage conditions
Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.
- Shipping conditions
Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.
08Donor
- Breed / subspecies
- Hampshire
- Donor age
- Adulto
09Legal and safety
- Safety precautions
- Cuando se planea almacenar un criovial en nitrógeno líquido para su descongelación futura, es obligatorio cumplir con estrictas medidas de seguridad. Es esencial contar con guantes y ropa de protección adecuados, y se requiere el uso de una mascarilla o lentes de seguridad durante la transferencia de muestras congeladas hacia o desde el tanque de nitrógeno líquido. Esto tiene como objetivo mitigar el riesgo de lesiones por posibles explosiones de los criotubos al retirarlos, lo que puede provocar la proyección de fragmentos afilados.
- Disclaimer
- Nuestras células se proporcionan exclusivamente con fines de investigación de laboratorio in vitro y no están destinadas a uso clínico ni diagnóstico, ni deben administrarse a seres humanos ni utilizarse con fines veterinarios. Los usuarios deben cumplir con todas las directrices y regulaciones aplicables para la manipulación y el uso de estas células en un entorno de investigación.
- Warranty
En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.
Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.
- Material Transfer Agreement required
- Yes