01General information
- Description
PK(15) 细胞系源自 PK-2A（1955 年从成年猪的肾脏中提取的细胞系），感染了猪 C 型肿瘤病毒（以前称为猪内源性逆转录病毒，PERV），该病毒被列为 2 类风险病原体。宿主细胞基因组包含 62 个 *pol* 基因拷贝，该基因编码逆转录酶和其他蛋白质。
最初，PK(15)细胞系产生的病毒颗粒被描述为有缺陷的，对包括人细胞系在内的多种哺乳动物细胞系没有感染性，因此被列为 1 类风险细胞系。然而，随后的研究表明，人 293 细胞可被 PK(15) 细胞的无细胞上清液有效感染。这一发现导致德国生物安全中央委员会（ZKBS）于2018年11月对PK（15）细胞系进行了重新分类。
PCR 分析表明，传播的病毒属于多型亚型 PERV-A 和 PERV-B。此外，还观察到 293 细胞产生的病毒颗粒对人体补体系统的灭活具有抵抗力。
PK(15) 细胞系除了具有重要的病毒学意义外，还是转染应用的合适宿主。由于其粘附生长特性，它在各种研究和实验环境中都具有很高的价值。
- Tissue
- 肾脏
- Synonyms
- PK(15)
- PK (15)
- PK 15
- PK15
- Porcine Kidney-15
02Classification
- Organism
- Pig
- Sex
- Male
- Growth properties
- Adherent
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- 上皮样
04Identifiers
- Citation
- PK-15（Cytion 目录号 607426）
- NCBI TaxID
- 9823
- Cellosaurus
- CVCL_2160
05Expression and susceptibility
- Viruses
- PCV1（猪圆环病毒 1）阳性，PCV2 阴性，PCV3 阴性
- Virus susceptibility
- 猪霍乱、非洲猪瘟、猪水泡性红斑病、口蹄疫 (FMDV)、水泡性口炎 (印第安纳)、疫苗病、再病毒 2、3、腺病毒 4、5、柯萨奇病毒 B2、B3、B4、B5、B6
- Virus resistance
- 脊髓灰质炎病毒 2
- Reverse transcriptase
- 积极的
06Handling and culture
- Culture medium
- EMEM（MEM Eagle），w：2 mM L-谷氨酰胺，w：2.2 g/L NaHCO3，w：EBSS（Cytion 文章编号 820100a）。
- Incubation atmosphere
37°C, 5%CO2, 加湿环境。
- Supplements
- 在培养基中添加 10% FBS 和 1% NEAA
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- 去除粘附细胞上的旧培养基，用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS，T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞，T25 烧瓶用 1-2 毫升，T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟，使其分离。孵育后，用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬，然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。
- Seeding density
- 2 × 10⁴ 个细胞/平方厘米
- Fluid renewal
- 每周 2 至 3 次
- Post-thaw recovery
- 让细胞从冷冻过程中恢复至少 24 到 48 小时。
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。
为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染，每天都要对细胞培养物进行目视检查。
- Freeze medium
- 我们使用完全生长培养基（包括 FBS）+10% DMSO 或 CM-1（Cytion 商品目录编号 800100）作为冷冻保存培养基，以获得足够的解冻后存活率，CM-1（Cytion 商品目录编号 800100）含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂，可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。
- Storage conditions
如需长期保存，可将样品瓶放入气相液氮中，温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。
- Shipping conditions
冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。
08Donor
- Breed / subspecies
- 汉普郡
- Donor age
- 成人
09Legal and safety
- Safety precautions
- 计划将低温样品储存在液氮中以便将来解冻时，必须遵守严格的安全措施。在将冷冻样本移入或移出液氮罐时，必须穿戴适当的防护手套和防护服，并使用面罩或安全护目镜。这样做是为了降低在移出时因冷冻样品爆炸而造成伤害的风险，因为爆炸可能导致锋利的碎片飞溅。
- Disclaimer
- 我们提供的细胞仅用于体外实验室研究目的，不用于临床或诊断用途，也不得用于人类或兽医目的。用户必须遵守在研究环境中处理和使用这些细胞的所有适用准则和法规。
- Warranty
在Cytion，我们保证产品的质量和活力。 我们保证，从我们的工厂发货后 60 天内，我们的细胞在开始培养时都是存活的。 我们保证所有材料均符合分析证书和/或产品说明书中描述的规格。
有关详细信息，请参阅我们的 <a href="" /Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">保修声明 。
- Material Transfer Agreement required
- Yes