01General information
- Description
La lignée cellulaire PK(15), dérivée de la lignée PK-2A — elle-même établie en 1955 à partir du rein d’un porc adulte —, est infectée par l’oncovirus porcin de type C (anciennement appelé rétrovirus endogène porcin, ou PERV), classé comme agent du groupe de risque 2. Le génome de la cellule hôte contient 62 copies du gène *pol*, qui code pour la transcriptase inverse et d’autres protéines.
Au départ, les particules virales produites par la lignée cellulaire PK(15) ont été décrites comme défectueuses et non infectieuses pour diverses lignées cellulaires de mammifères, y compris une lignée cellulaire humaine, ce qui a conduit à son classement dans le groupe de risque 1. Cependant, des études ultérieures ont démontré que les cellules humaines 293 pouvaient être infectées de manière productive par le surnageant acellulaire des cellules PK(15). Cette découverte a entraîné la reclassification de la lignée cellulaire PK(15) par la Commission centrale allemande pour la sécurité biologique (ZKBS) en novembre 2018.
Des analyses par PCR ont révélé que les virus transmis appartenaient aux sous-types polytropiques PERV-A et PERV-B. De plus, on a observé que les particules virales produites par les cellules 293 résistaient à l’inactivation par le système du complément humain.
Outre son importance virologique, la lignée cellulaire PK(15) constitue également un hôte approprié pour les applications de transfection. En raison de ses propriétés de croissance adhérente, elle présente une grande valeur dans divers contextes de recherche et d’expérimentation.
- Tissue
- Rein
- Synonyms
- PK(15)
- PK (15)
- PK 15
- PK15
- Porcine Kidney-15
02Classification
- Organism
- Pig
- Sex
- Male
- Growth properties
- Adherent
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- De type épithélial
04Identifiers
- Citation
- PK-15 (numéro de catalogue Cytion 607426)
- NCBI TaxID
- 9823
- Cellosaurus
- CVCL_2160
05Expression and susceptibility
- Viruses
- Positif au PCV1 (circovirus porcin 1), négatif au PCV2, négatif au PCV3
- Virus susceptibility
- Choléra porcin, peste porcine africaine, exanthème vésiculeux du porc, fièvre aphteuse (virus de la fièvre aphteuse), stomatite vésiculeuse (Indiana), vaccinia, réovirus 2 et 3, adénovirus 4 et 5, coxsackievirus B2, B3, B4, B5 et B6
- Virus resistance
- Poliovirus 2
- Reverse transcriptase
- Positif
06Handling and culture
- Culture medium
- EMEM (MEM Eagle), contenant : 2 mM de L-glutamine, 2,2 g/L de NaHCO₃, et EBSS (référence Cytion 820100a)
- Incubation atmosphere
37 °C, 5 % de CO₂, atmosphère humidifiée.
- Supplements
- Ajouter au milieu 10 % de FBS et 1 % de NEAA
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- Retirez l’ancien milieu des cellules adhérentes et lavez-les avec du PBS sans calcium ni magnésium. Pour les flacons T25, utilisez 3 à 5 ml de PBS, et pour les flacons T75, utilisez 5 à 10 ml. Ensuite, recouvrez complètement les cellules d’Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laissez les cellules incuber à température ambiante pendant 8 à 10 minutes afin de les détacher. Après l’incubation, mélangez délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifugez à 300 x g pendant 3 minutes. Éliminez le surnageant, remettez les cellules en suspension dans du milieu frais, puis transférez-les dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais.
- Seeding density
- 2 × 10⁴ cellules/cm²
- Fluid renewal
- 2 à 3 fois par semaine
- Post-thaw recovery
- Laissez les cellules se remettre du processus de congélation pendant au moins 24 à 48 heures.
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.
Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.
- Freeze medium
- Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (contenant du sérum fœtal bovin) + 10 % de DMSO pour assurer une viabilité adéquate après décongélation, ou du CM-1 (référence Cytion 800100), qui contient des osmoprotecteurs et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryoconservation.
- Storage conditions
Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.
- Shipping conditions
Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.
08Donor
- Breed / subspecies
- Hampshire
- Donor age
- Adulte
09Legal and safety
- Safety precautions
- Lorsqu’on prévoit entreposer un cryotube dans de l’azote liquide en vue d’une décongélation ultérieure, il est impératif de respecter des mesures de sécurité rigoureuses. Le port de gants et de vêtements de protection appropriés est essentiel, et l’utilisation d’un masque facial ou de lunettes de protection est obligatoire lors du transfert d’échantillons congelés vers ou depuis le réservoir d’azote liquide. Cette précaution vise à réduire le risque de blessure causé par d’éventuelles explosions de cryotubes lors de leur retrait, pouvant entraîner la projection de fragments coupants.
- Disclaimer
- Nos cellules sont fournies exclusivement à des fins de recherche in vitro en laboratoire et ne sont pas destinées à un usage clinique ou diagnostique; elles ne doivent pas non plus être administrées à des humains ni utilisées à des fins vétérinaires. Les utilisateurs doivent respecter toutes les lignes directrices et tous les règlements applicables concernant la manipulation et l’utilisation de ces cellules dans un contexte de recherche.
- Warranty
Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.
Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.
- Material Transfer Agreement required
- Yes