PK-15

A linhagem celular PK(15), derivada da PK-2A — uma linhagem celular estabelecida em 1955 a partir do rim de um porco adulto —, está infectada pelo oncovírus suíno do tipo C (anteriormente conhecido como retrovírus endógeno suíno, PERV), que é classificado como um agente do grupo de risco 2. O genoma da célula hospedeira contém 62 cópias do gene *pol*, que codifica a transcriptase reversa e outras proteínas.

Inicialmente, as partículas virais produzidas pela linha celular PK(15) foram descritas como defeituosas e não infecciosas para diversas linhas celulares de mamíferos, incluindo uma linha celular humana, o que levou à sua classificação como linha celular do grupo de risco 1. No entanto, estudos subsequentes demonstraram que as células humanas 293 podiam ser infectadas de forma produtiva pelo sobrenadante livre de células das células PK(15). Essa descoberta resultou na reclassificação da linhagem celular PK(15) pela Comissão Central Alemã de Segurança Biológica (ZKBS) em novembro de 2018.

Análises por PCR revelaram que os vírus transmitidos pertenciam aos subtipos politrópicos PERV-A e PERV-B. Além disso, observou-se que as partículas virais produzidas pelas células 293 eram resistentes à inativação pelo sistema do complemento humano.

Além de sua importância virológica, a linhagem celular PK(15) também serve como hospedeiro adequado para aplicações de transfecção. Devido às suas propriedades de crescimento aderente, ela é altamente valiosa em diversos contextos de pesquisa e experimentação.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.