01General information
- Description
PK(15) 細胞系源自 PK-2A 細胞系，後者於 1955 年由一頭成年豬的腎臟建立，該細胞系感染了豬 C 型腫瘤病毒（前稱豬內源性逆轉錄病毒，PERV），該病毒被歸類為第 2 類風險病原體。 宿主細胞基因組中含有 62 份 *pol* 基因，該基因編碼逆轉錄酶及其他蛋白質。
最初，PK(15) 細胞系所產生的病毒顆粒被描述為缺陷型，且對包括人類細胞系在內的各種哺乳動物細胞系均不具感染性，因此被歸類為第 1 風險組細胞系。 然而，後續研究證實，PK(15) 細胞的無細胞上清液可有效感染人類 293 細胞。此發現促使德國生物安全中央委員會（ZKBS）於 2018 年 11 月重新分類 PK(15) 細胞系。
聚合酶鏈式反應（PCR）分析顯示，經傳遞的病毒屬於多嗜性亞型 PERV-A 和 PERV-B。此外，研究觀察到 293 細胞所產生的病毒顆粒能抵抗人類補體系統的滅活作用。
除了其病毒學上的重要性外，PK(15) 細胞系亦是轉染應用中的合適宿主。由於其具貼壁生長特性，在各種研究與實驗情境中具有極高的價值。
- Tissue
- 腎臟
- Synonyms
- PK(15)
- PK (15)
- PK 15
- PK15
- Porcine Kidney-15
02Classification
- Organism
- Pig
- Sex
- Male
- Growth properties
- Adherent
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- 上皮樣
04Identifiers
- Citation
- PK-15（Cytion 型號 607426）
- NCBI TaxID
- 9823
- Cellosaurus
- CVCL_2160
05Expression and susceptibility
- Viruses
- PCV1（豬圓環病毒1型）呈陽性，PCV2呈陰性，PCV3呈陰性
- Virus susceptibility
- 豬瘟、非洲豬瘟、豬水皰性皮疹、口蹄疫（FMDV）、水皰性口炎（印第安納型）、 牛痘病毒、輪狀病毒 2 型、3 型、腺病毒 4 型、5 型、柯薩奇病毒 B2 型、B3 型、B4 型、B5 型、B6 型
- Virus resistance
- 小兒麻痺病毒 2 型
- Reverse transcriptase
- 正向
06Handling and culture
- Culture medium
- EMEM（MEM Eagle），含 2 mM L-谷氨醯胺，含 2.2 g/L NaHCO₃，含 EBSS（Cytion 產品編號 820100a）
- Incubation atmosphere
37°C，5% CO₂，加濕環境。
- Supplements
- 在培養基中加入 10% FBS 和 1% NEAA
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- 從貼壁細胞中移除舊培養基，並用不含鈣和鎂的PBS洗滌細胞。T25培養瓶使用3-5毫升PBS，T75培養瓶則使用5-10毫升。 接著，用 Accutase 完全覆蓋細胞，T25 培養瓶使用 1–2 毫升，T75 培養瓶則使用 2.5 毫升。將細胞於室溫下孵育 8–10 分鐘，使其脫附。 孵育後，將細胞與 10 毫升培養基輕柔混合以使其重新懸浮，然後以 300xg 離心 3 分鐘。棄去上清液，將細胞重新懸浮於新鮮培養基中，並轉移至已預先加入新鮮培養基的新培養瓶中。
- Seeding density
- 2 × 10⁴ 個細胞/cm²
- Fluid renewal
- 每週 2 至 3 次
- Post-thaw recovery
- 請讓細胞有至少 24 至 48 小時的時間從冷凍過程中恢復。
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法，排除支原體污染的可能性。
為確保無細菌、真菌或酵母菌污染，每日均會對細胞培養物進行目視檢查。
- Freeze medium
- 作為冷凍保存培養基，我們使用完全生長培養基（含 FBS）+ 10% DMSO 以確保解凍後的存活率，或使用 CM-1 （Cytion 型號 800100），該培養基含有經優化的滲透保護劑和代謝穩定劑，可提升細胞恢復率並減輕冷凍誘導的壓力。
- Storage conditions
若需長期保存，請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前，可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中，作為短期過渡步驟。
- Shipping conditions
冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏，並裝於經驗證的隔熱包裝中，包裝內含有足夠的冷媒，以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後，請立即檢查容器，並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。
08Donor
- Breed / subspecies
- 漢普郡
- Donor age
- 成人
09Legal and safety
- Safety precautions
- 若計劃將低溫試管存放在液態氮中以供日後解凍，必須嚴格遵守相關安全措施。 必須穿戴適當的防護手套和防護服，且在將冷凍樣本移入或移出液氮罐時，必須佩戴口罩或安全護目鏡。此舉旨在降低因取出時冷凍試管可能發生爆炸而導致受傷的風險，此類爆炸可能造成尖銳碎片飛濺。
- Disclaimer
- 本產品所提供的細胞僅供體外實驗室研究之用，不得用於臨床或診斷用途，亦不得施予人類或用於獸醫用途。使用者必須遵守所有適用於研究環境中處理及使用這些細胞的相關指引與法規。
- Warranty
在 Cytion，我們對產品的品質與存活率提供保障。 我們保證，自本公司設施出貨後 60 天內，我們的細胞在培養開始時仍具存活能力。 我們保證所有材料均符合 分析證明書及／或產品說明書中所載的規格。
詳情請參閱我們的 《保固聲明》。
- Material Transfer Agreement required
- Yes