PK-15

เซลล์ไลน์ PK(15) ซึ่งได้มาจาก PK-2A ซึ่งเป็นเซลล์ไลน์ที่ก่อตั้งขึ้นในปี 1955 จากไตของหมูผู้ใหญ่ ถูกติดเชื้อด้วยไวรัสก่อมะเร็งชนิด C ในสุกร (เดิมเรียกว่าไวรัสเรโทรไวรัสภายในสุกร, PERV) ซึ่งจัดอยู่ในกลุ่มเสี่ยงที่ 2 ของเชื้อโรค จีโนมของเซลล์เจ้าบ้านประกอบด้วยยีน *pol* จำนวน 62 ชุด ซึ่งเข้ารหัสสำหรับเอนไซม์รีเวิร์สทรานสคริปเตสและโปรตีนอื่นๆ

ในตอนแรก อนุภาคไวรัสที่ผลิตโดยสายพันธุ์เซลล์ PK(15) ถูกอธิบายว่ามีข้อบกพร่องและไม่สามารถติดเชื้อได้สำหรับสายพันธุ์เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมหลายชนิด รวมถึงสายพันธุ์เซลล์มนุษย์ด้วย ซึ่งนำไปสู่การจัดประเภทเป็นสายพันธุ์เซลล์กลุ่มความเสี่ยงระดับ 1อย่างไรก็ตาม การศึกษาต่อมาได้แสดงให้เห็นว่า เซลล์มนุษย์ 293 สามารถติดเชื้ออย่างมีประสิทธิภาพโดยน้ำใสที่แยกได้จากเซลล์ PK(15) ที่ไม่มีเซลล์อยู่ (cell-free supernatant) ผลการค้นพบนี้ทำให้คณะกรรมการกลางด้านความปลอดภัยทางชีวภาพของเยอรมนี (ZKBS) ได้ทำการจัดหมวดหมู่เซลล์ไลน์ PK(15) ใหม่ในเดือนพฤศจิกายนปี 2018

การวิเคราะห์ด้วยวิธี PCR พบว่าไวรัสที่แพร่กระจายเป็นสายพันธุ์ย่อย polytropic PERV-A และ PERV-B นอกจากนี้ยังพบว่าอนุภาคไวรัสที่ผลิตโดยเซลล์ 293 มีความต้านทานต่อการทำลายโดยระบบคอมพลีเมนต์ของมนุษย์

นอกเหนือจากความสำคัญทางไวรัสวิทยาแล้ว สายพันธุ์เซลล์ PK(15) ยังทำหน้าที่เป็นโฮสต์ที่เหมาะสมสำหรับการประยุกต์ใช้การถ่ายโอนยีน เนื่องจากคุณสมบัติการเจริญเติบโตแบบยึดเกาะ จึงมีคุณค่าสูงในการวิจัยและการทดลองต่างๆ

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.