PK-15
Cell line · Toote number 607426
The PK(15) cell line, derived from PK-2A, a cell line established in 1955 from the kidney of an adult pig, is infected with the porcine type-C oncovirus (...
Kohandamine / Soovitused
- PK-15Cell line€430.00
01Üldine teave
- Kirjeldus
PK(15) rakuliin, mis on saadud PK-2A rakuliinist, mis loodi 1955. aastal täiskasvanud sea neerudest, on nakatunud sigade C-tüüpi onkoviirusega (varem tuntud kui sigade endogeenne retroviirus, PERV), mis on klassifitseeritud 2. riskirühma haigustekitajaks. Peremeesraku genoom sisaldab 62 koopiat *pol*-geeni, mis kodeerib pöördtranskriptaasi ja teisi valke.
Esialgu kirjeldati PK(15) rakuliini toodetud viiruse osakesi kui defektseid ja mitmete imetajate rakuliinide, sealhulgas inimese rakuliini jaoks mitteinfektsioone tekitavaid, mis viis selle liigitamiseni 1. riskirühma rakuliiniks. Hilisemad uuringud näitasid siiski, et inimese 293 rakke saab produktiivselt nakatada PK(15) rakkude rakuvaba supernatandiga. Selle tulemusel klassifitseeris Saksamaa bioloogilise ohutuse keskkomisjon (ZKBS) rakuliini PK(15) 2018. aasta novembris ümber.
PCR-analüüsid näitasid, et ülekantud viirused kuulusid polütroopsetesse alatüüpidesse PERV-A ja PERV-B. Lisaks täheldati, et 293 rakkude toodetud viiruseosakesed olid resistentsed inaktiveerimisele inimese komplemendisüsteemi poolt.
Lisaks viroloogilisele tähtsusele on PK(15) rakuliin ka sobiv peremees transfektsioonirakenduste jaoks. Tänu oma adherentse kasvuomadustele on see väga väärtuslik erinevates uurimis- ja katsealastes tingimustes.
- Kude
- Neerud
- Sünonüümid
- PK(15)
- PK (15)
- PK 15
- PK15
- Porcine Kidney-15
02Klassifikatsioon
- Organism
- Siga
- Sugu
- Mees
- Kasvuvõime
- Järgija
- Bioloogilise ohutuse tase
- 1
03Omadused
- Morfoloogia
- Epiteelilaadsed
04Tunnused
- Viide
- PK-15 (Cytioni katalooginumber 607426)
- NCBI maksukood
- 9823
- Cellosaurus
- CVCL_2160
05Avaldumine ja vastuvõtlikkus
- Viirused
- PCV1 (sigade tsirkoviirus 1) positiivne, PCV2 negatiivne, PCV3 negatiivne
- Viirusele vastuvõtlikkus
- Sigade koolera, sigade Aafrika katk, sigade vesikulaarne eksanteem, suu- ja sõrataud (FMDV), vesikulaarne stomatiit (Indiana), vaktsiin, reoviirus 2, 3, adenoviirus 4, 5, koksackieviirus B2, B3, B4, B5, B6
- Viirusresistentsus
- Polioviirus 2
- Pöördtranskriptaas
- Positiivne
06Käsitlemine ja kasvatamine
- Kasvatuskeskkond
- EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytioni artikli number 820100a)
- Inkubatsiooni keskkond
37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.
- Toidulisandid
- Täiendada söötme 10% FBS ja 1% NEAAga
- Dissotsiatsioonireaktiiv
- Accutase
- Kultuuri edasikasvatamine
- Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
- Külvitihedus
- 2 x 104 rakku/cm2
- Vedeliku vahetus
- 2 kuni 3 korda nädalas
- Taastumine pärast sulamist
- Laske rakkudel külmutusprotsessist taastuda vähemalt 24-48 tundi.
- Sulatamine ja kasvatamine
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine
- Viljatus
Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.
Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.
- Külmutuskeskkond
- Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
- Säilitamistingimused
Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.
- Tarne- ja kohaletoimetamistingimused
Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.
08Annetaja
- Tõug / alamliik
- Hampshire
- Doonori vanus
- Täiskasvanud
09Õiguslikud ja ohutusalased küsimused
- Ohutusnõuded
- Kui plaanitakse krüoviaalide säilitamist vedelas lämmastikus tulevase sulatamise eesmärgil, on kohustuslik järgida rangeid ohutusmeetmeid. Asjakohased kaitsekindad ja -riietus on hädavajalikud ning külmutatud proovide vedela lämmastiku mahutisse või mahutist väljaviimisel tuleb kasutada näomaski või kaitseprille. See on vajalik selleks, et vähendada vigastuste ohtu, mis tuleneb võimalikest krüoviaalide plahvatustest eemaldamisel, mille tagajärjel võivad välja paiskuda teravad killud.
- Vastutuse välistamine
- Meie rakud on ette nähtud üksnes in vitro laboratoorseks uurimistööks ning need ei ole mõeldud kliiniliseks või diagnostiliseks kasutamiseks, samuti ei tohi neid manustada inimestele ega kasutada veterinaarsetel eesmärkidel. Kasutajad peavad järgima kõiki kohaldatavaid suuniseid ja eeskirju nende rakkude käitlemise ja kasutamise kohta teadusuuringutes.
- Garantii
Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele
Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest
- Vajalik on materjalide üleandmise leping
- Jah