NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9

La lignée cellulaire NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9 est une lignée cellulaire clonale stable dérivée de cellules rénales normales de rat (NRK) par transfection d’un plasmide circulaire. Ce plasmide contient des constructions génétiques codant pour quatre répétitions en tandem de sites de liaison à l’ARN lambda N22 et trois répétitions en tandem de marqueurs mEGFP (protéine fluorescente verte monomérique améliorée) fusionnés au signal de localisation nucléaire M9. Après la transfection, les cellules ont été soumises à une sélection par résistance aux médicaments afin d’assurer la stabilité des modifications génétiques.

Environ 50 % des cellules de cette lignée clonale stable expriment le marqueur fluorescent 4xλN22-3xmEGFP-M9, ce qui indique que l’incorporation du plasmide a réussi. L’expression de ce marqueur permet la visualisation en temps réel des processus intracellulaires, facilitée par le signal fluorescent puissant de la mEGFP. Le signal de localisation nucléaire M9 garantit que les protéines de fusion exprimées sont transportées vers le noyau, ce qui rend cette lignée cellulaire particulièrement utile pour l’étude du transport nucléaire-cytoplasmique, de la dynamique de l’ARN et de la régulation de l’expression génique.

Cette lignée cellulaire NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9 est précieuse pour les chercheurs qui s’intéressent aux interactions entre les protéines de liaison à l’ARN, au métabolisme de l’ARN et aux mécanismes sous-jacents à l’importation et à l’exportation nucléaires. La présence du marqueur mEGFP permet d’utiliser des techniques d’imagerie avancées telles que la microscopie confocale et l’imagerie de cellules vivantes, offrant ainsi un aperçu détaillé de la dynamique spatiale et temporelle des composants cellulaires. Malgré sa variété, cette lignée cellulaire demeure un outil puissant pour analyser les voies moléculaires complexes et comprendre les fonctions cellulaires à un niveau plus approfondi.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.