NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9

La linea cellulare NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9 è una linea cellulare clonale stabile derivata da cellule di rene normale di ratto (NRK) attraverso la trasfezione di un plasmide circolare. Questo plasmide contiene costrutti genetici che codificano quattro ripetizioni in tandem dei siti di legame dell'RNA di lambda N22 e tre ripetizioni in tandem di tag mEGFP (monomeric enhanced green fluorescent protein) fusi con il segnale di localizzazione nucleare M9. Dopo la trasfezione, le cellule sono state sottoposte a selezione della resistenza ai farmaci per garantire la stabilità delle modifiche genetiche.

Circa il 50% delle cellule di questa linea clonale stabile esprime il marcatore fluorescente 4xλN22-3xmEGFP-M9, indicando il successo dell'incorporazione del plasmide. L'espressione di questo marcatore consente la visualizzazione in tempo reale dei processi intracellulari, facilitata dal robusto segnale fluorescente di mEGFP. Il segnale di localizzazione nucleare M9 assicura che le proteine di fusione espresse siano trasportate nel nucleo, rendendo questa linea cellulare particolarmente utile per lo studio del trasporto nucleare-citoplasmatico, della dinamica dell'RNA e della regolazione dell'espressione genica.

Questa linea cellulare NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9 è preziosa per i ricercatori che si concentrano sulle interazioni tra proteine che legano l'RNA, sul metabolismo dell'RNA e sui meccanismi alla base dell'importazione e dell'esportazione nucleare. La presenza del marcatore mEGFP consente di utilizzare tecniche di imaging avanzate come la microscopia confocale e l'imaging di cellule vive, fornendo informazioni dettagliate sulle dinamiche spaziali e temporali dei componenti cellulari. Nonostante la variegatura, la linea cellulare rimane un potente strumento per la dissezione di complessi percorsi molecolari e la comprensione delle funzioni cellulari a un livello più profondo.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia