NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9

A linhagem celular NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9 é uma linhagem celular clonal estável derivada de células renais normais de rato (NRK) por meio da transfecção de um plasmídeo circular. Esse plasmídeo contém construções genéticas que codificam quatro repetições em tandem de sítios de ligação ao RNA lambda N22 e três repetições em tandem de marcadores mEGFP (proteína fluorescente verde monomérica aprimorada) fundidos com o sinal de localização nuclear M9. Após a transfecção, as células foram submetidas a seleção por resistência a medicamentos para garantir a estabilidade das modificações genéticas.

Aproximadamente 50% das células dessa linhagem clonal estável expressam o marcador fluorescente 4xλN22-3xmEGFP-M9, indicando a incorporação bem-sucedida do plasmídeo. A expressão desse marcador permite a visualização em tempo real de processos intracelulares, facilitada pelo robusto sinal fluorescente da mEGFP. O sinal de localização nuclear M9 garante que as proteínas de fusão expressas sejam transportadas para o núcleo, tornando essa linhagem celular particularmente útil para o estudo do transporte nuclear-citoplasmático, da dinâmica do RNA e da regulação da expressão gênica.

Essa linha celular NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9 é valiosa para pesquisadores que se dedicam às interações entre proteínas de ligação ao RNA, ao metabolismo do RNA e aos mecanismos subjacentes à importação e exportação nuclear. A presença do marcador mEGFP permite o uso de técnicas avançadas de imagem, como microscopia confocal e imagem de células vivas, proporcionando insights detalhados sobre a dinâmica espacial e temporal dos componentes celulares. Apesar da variação, a linhagem celular continua sendo uma ferramenta poderosa para analisar vias moleculares complexas e compreender as funções celulares em um nível mais profundo.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.