NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9

Linia komórkowa NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9 jest klonalną, stabilną linią komórkową uzyskaną z normalnych komórek nerki szczura (NRK) poprzez transfekcję kolistego plazmidu. Plazmid ten zawiera konstrukty genetyczne kodujące cztery tandemowe powtórzenia miejsc wiązania RNA lambda N22 i trzy tandemowe powtórzenia znaczników mEGFP (monomeryczne wzmocnione zielone białko fluorescencyjne) połączone z sygnałem lokalizacji jądrowej M9. Po transfekcji komórki poddano selekcji odporności na leki, aby zapewnić stabilność modyfikacji genetycznych.

Około 50% komórek w tej stabilnej linii klonalnej wykazuje ekspresję markera fluorescencyjnego 4xλN22-3xmEGFP-M9, co wskazuje na udaną inkorporację plazmidu. Ekspresja tego markera pozwala na wizualizację procesów wewnątrzkomórkowych w czasie rzeczywistym, ułatwioną przez silny sygnał fluorescencyjny mEGFP. Sygnał lokalizacji jądrowej M9 zapewnia, że wyrażone białka fuzyjne są transportowane do jądra, dzięki czemu ta linia komórkowa jest szczególnie przydatna do badania transportu jądrowo-cytoplazmatycznego, dynamiki RNA i regulacji ekspresji genów.

Ta linia komórkowa NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9 jest cenna dla badaczy koncentrujących się na interakcjach białek wiążących RNA, metabolizmie RNA oraz mechanizmach leżących u podstaw importu i eksportu jądrowego. Obecność markera mEGFP umożliwia zaawansowane techniki obrazowania, takie jak mikroskopia konfokalna i obrazowanie żywych komórek, zapewniając szczegółowy wgląd w przestrzenną i czasową dynamikę składników komórkowych. Pomimo zróżnicowania, linia komórkowa pozostaje potężnym narzędziem do badania złożonych szlaków molekularnych i zrozumienia funkcji komórkowych na głębszym poziomie.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym