NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9

A linha celular NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9 é uma linha celular clonal estável derivada de células normais de rim de rato (NRK) através da transfecção de um plasmídeo circular. Este plasmídeo contém construções genéticas que codificam quatro repetições em tandem de sítios de ligação ao ARN de lambda N22 e três repetições em tandem de etiquetas mEGFP (proteína fluorescente verde melhorada monomérica) fundidas com o sinal de localização nuclear M9. Após a transfecção, as células foram submetidas a uma seleção de resistência aos medicamentos para garantir a estabilidade das modificações genéticas.

Aproximadamente 50% das células desta linha clonal estável expressam o marcador fluorescente 4xλN22-3xmEGFP-M9, indicando uma incorporação bem sucedida do plasmídeo. A expressão deste marcador permite a visualização em tempo real dos processos intracelulares, facilitada pelo sinal fluorescente robusto do mEGFP. O sinal de localização nuclear M9 garante que as proteínas de fusão expressas são transportadas para o núcleo, tornando esta linha celular particularmente útil para o estudo do transporte nuclear-citoplasmático, da dinâmica do ARN e da regulação da expressão génica.

Esta linha celular NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9 é valiosa para os investigadores que se dedicam às interações entre proteínas de ligação ao ARN, ao metabolismo do ARN e aos mecanismos subjacentes à importação e exportação nucleares. A presença do marcador mEGFP permite a utilização de técnicas de imagiologia avançadas, como a microscopia confocal e a imagiologia de células vivas, proporcionando uma visão detalhada da dinâmica espacial e temporal dos componentes celulares. Apesar da variegação, a linha celular continua a ser uma ferramenta poderosa para dissecar vias moleculares complexas e compreender as funções celulares a um nível mais profundo.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia