NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9

La línea celular NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9 es una línea celular clonal estable derivada de células normales de riñón de rata (NRK) mediante la transfección de un plásmido circular. Este plásmido contiene construcciones genéticas que codifican cuatro repeticiones en tándem de sitios de unión a ARN lambda N22 y tres repeticiones en tándem de etiquetas mEGFP (proteína verde fluorescente monomérica mejorada) fusionadas con la señal de localización nuclear M9. Tras la transfección, las células se sometieron a una selección de resistencia a fármacos para garantizar la estabilidad de las modificaciones genéticas.

Aproximadamente el 50% de las células de esta línea clonal estable expresan el marcador fluorescente 4xλN22-3xmEGFP-M9, lo que indica la correcta incorporación del plásmido. La expresión de este marcador permite la visualización en tiempo real de los procesos intracelulares, facilitada por la robusta señal fluorescente de la mEGFP. La señal de localización nuclear M9 asegura que las proteínas de fusión expresadas son transportadas al núcleo, lo que hace que esta línea celular sea particularmente útil para estudiar el transporte nuclear-citoplasmático, la dinámica del ARN y la regulación de la expresión génica.

Esta línea celular NRK-4xlambdaN22-3xmEGFP-M9 es valiosa para los investigadores que se centran en las interacciones de las proteínas de unión a ARN, el metabolismo del ARN y los mecanismos subyacentes a la importación y exportación nuclear. La presencia del marcador mEGFP permite el uso de técnicas de imagen avanzadas como la microscopía confocal y la imagen de células vivas, lo que proporciona una visión detallada de la dinámica espacial y temporal de los componentes celulares. A pesar de la variegación, la línea celular sigue siendo una poderosa herramienta para diseccionar vías moleculares complejas y comprender las funciones celulares a un nivel más profundo.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía