NRK-EGFP2-Nup50

La lignée cellulaire NRK-EGFP2-Nup50 est une lignée cellulaire clonale stable dérivée de cellules rénales normales de rat (NRK). Cette lignée cellulaire a été générée par la transfection d’un plasmide circulaire contenant le gène codant pour la protéine de fusion de la protéine fluorescente verte améliorée (EGFP) et de la nucléoporine 50 (Nup50), suivie d’une sélection pour la résistance aux médicaments. Par conséquent, environ 50 % des cellules expriment la protéine de fusion EGFP3-Nup50, ce qui permet la visualisation et le suivi de la Nup50 au sein de l’environnement cellulaire.

La Nup50 est un composant essentiel du complexe des pores nucléaires, qui est responsable de la régulation du transport des molécules entre le noyau et le cytoplasme. Le marqueur EGFP3 permet l’imagerie de cellules vivantes et l’utilisation d’autres techniques basées sur la fluorescence pour étudier la localisation, la dynamique et les interactions de la Nup50. Bien qu’il s’agisse d’une lignée cellulaire stable, les cellules NRK-EGFP2-Nup50 présentent une certaine hétérogénéité, ce qui indique une variabilité dans les niveaux d’expression de la protéine de fusion EGFP3-Nup50 d’une cellule à l’autre.

Cette lignée cellulaire est particulièrement utile pour la recherche axée sur le transport nucléocytoplasmique, la dynamique du complexe des pores nucléaires et le rôle fonctionnel de Nup50 dans divers processus cellulaires. Les cellules NRK-EGFP2-Nup50 se prêtent à toute une gamme d’approches expérimentales, notamment la récupération de la fluorescence après photoblanchiment (FRAP), la spectroscopie de corrélation de fluorescence (FCS) et d’autres techniques de microscopie avancées. Ces études peuvent apporter des éclaircissements sur les mécanismes moléculaires du transport nucléaire et contribuer à la compréhension des maladies associées à un dysfonctionnement de ce transport, telles que certains cancers et troubles neurodégénératifs.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.