Langsung ke isi
NRK-EGFP2-Nup50
Tisu
Ginjal
Sinonim
NRK EGFP2-Nup50

Dokumen

NRK-EGFP2-Nup50

Cell line · Nomor produk 500726

Lini sel NRK-EGFP2-Nup50 adalah lini sel klonal yang stabil yang berasal dari sel ginjal tikus normal (NRK). Lini sel ini dihasilkan melalui transfeksi...

€800.00belum termasuk pajak dan ongkos kirim

Penyesuaian / Rekomendasi

Tersedia
Lot
Direkomendasikan (stok terbaru)
1

01Informasi umum

Deskripsi

Garis sel NRK-EGFP2-Nup50 adalah garis sel stabil klonal yang berasal dari sel ginjal tikus normal (NRK). Garis sel ini dihasilkan melalui transfeksi plasmid melingkar yang mengandung gen yang mengkode protein fusi Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) dan Nucleoporin 50 (Nup50), diikuti dengan seleksi resistensi obat. Hasilnya, sekitar 50% sel mengekspresikan protein fusi EGFP3-Nup50, yang memungkinkan visualisasi dan pelacakan Nup50 di dalam lingkungan sel.

Nup50 adalah komponen penting dari kompleks pori nuklir, yang bertanggung jawab untuk mengatur pengangkutan molekul antara nukleus dan sitoplasma. Tag EGFP3 memungkinkan pencitraan sel hidup dan teknik berbasis fluoresensi lainnya untuk mempelajari lokalisasi, dinamika, dan interaksi Nup50. Meskipun merupakan garis sel yang stabil, sel NRK-EGFP2-Nup50 menunjukkan beberapa variasi, yang menunjukkan variabilitas dalam tingkat ekspresi protein fusi EGFP3-Nup50 di antara sel-sel.

Garis sel ini sangat berharga untuk penelitian yang berfokus pada transpor nukleositoplasma, dinamika kompleks pori nuklir, dan peran fungsional Nup50 dalam berbagai proses seluler. Sel NRK-EGFP2-Nup50 cocok untuk berbagai pendekatan eksperimental, termasuk pemulihan fluoresensi setelah pemutihan foto (FRAP), spektroskopi korelasi fluoresensi (FCS), dan teknik mikroskop canggih lainnya. Studi-studi ini dapat memberikan wawasan tentang mekanisme molekuler transpor nuklir dan berkontribusi pada pemahaman penyakit yang terkait dengan disfungsi transpor nuklir, seperti kanker tertentu dan gangguan neurodegeneratif.

Tisu
Ginjal
Sinonim
  • NRK EGFP2-Nup50

02Klasifikasi

Organisme
Tikus
Sifat-sifat pertumbuhan
Pengikut
Tingkat keamanan hayati
1

03Karakteristik

Morfologi
Sel mirip fibroblas dengan bentuk fusiform

04Pengidentifikasi

Referensi
NRK-EGFP2-Nup50 (Nomor katalog Cytion 500726)
Nomor Identifikasi Pajak NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_AV93
Nasabah penyimpanan
Laboratorium Ellenberg (Ellenberg Lab) (EMBL)

05Ekspresi dan kerentanan

Reseptor yang diekspresikan
Faktor pertumbuhan epidermal (EGF), aktivitas stimulasi multiplikasi (MSA)
Ekspresi protein
EGFP3-Nup50
Produk
NUP50 (Nucleoporin 50)

06Penanganan dan budidaya

Media kultur
DMEM, w: 4,5 g/L Glukosa, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natrium piruvat (Nomor artikel Cytion 820300a)
Suasana inkubasi

37°C, 5%CO2, atmosfer yang dilembabkan.

Suplemen
Tambahkan media dengan 10% FBS, 0,5 mg/mL G418
Reagen disosiasi
Accutase
Perbanyakan sel
Buang media lama dan cuci sel dengan PBS. Tambahkan larutan tripsin 0,025% / 0,02% EDTA yang baru disiapkan yang dipanaskan hingga 37 derajat Celcius dan tunggu hingga sel terlepas, yang biasanya membutuhkan waktu sekitar 5 menit. Netralkan tripsin dengan menambahkan medium segar, lalu pindahkan campuran sel ke dalam tabung dan sentrifugasi. Setelah sentrifugasi, keluarkan supernatan, resuspensi pelet sel dalam media kultur segar, dan pindahkan suspensi ke labu baru. Masukkan G418 ke dalam media kultur untuk mencapai konsentrasi akhir 0,5 mg / ml
Kepadatan penanaman
2 hingga 4 x 10⁴ sel/cm²
Pergantian cairan
2 hingga 3 kali per minggu
Pencairan dan pembiakan

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Pengendalian mutu dan kriopreservasi

Kemandulan

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Media pembekuan
Sebagai media kriopreservasi, kami menggunakan media pertumbuhan lengkap (termasuk FBS) + 10% DMSO untuk viabilitas pasca-pencairan yang memadai, atau CM-1 (nomor katalog Cytion 800100), yang mencakup osmoprotektan yang dioptimalkan dan penstabil metabolisme untuk meningkatkan pemulihan dan mengurangi stres yang diinduksi kriopreservasi.
Kondisi penyimpanan

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Ketentuan pengiriman

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

08Donatur

Jenis / subspesies
OsborneMendel