NRK-EGFP2-Nup50

Linia komórkowa NRK-EGFP2-Nup50 jest klonalną stabilną linią komórkową pochodzącą z normalnych szczurzych komórek nerkowych (NRK). Ta linia komórkowa została wygenerowana poprzez transfekcję kolistego plazmidu zawierającego gen kodujący białko fuzyjne Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) i Nucleoporin 50 (Nup50), a następnie selekcję oporności na leki. W rezultacie około 50% komórek wykazuje ekspresję białka fuzyjnego EGFP3-Nup50, co umożliwia wizualizację i śledzenie Nup50 w środowisku komórkowym.

Nup50 jest krytycznym składnikiem kompleksu porów jądrowych, który jest odpowiedzialny za regulację transportu cząsteczek między jądrem a cytoplazmą. Znacznik EGFP3 pozwala na obrazowanie żywych komórek i inne techniki oparte na fluorescencji w celu zbadania lokalizacji, dynamiki i interakcji Nup50. Pomimo tego, że jest to stabilna linia komórkowa, komórki NRK-EGFP2-Nup50 wykazują pewną zmienność, co wskazuje na zmienność poziomów ekspresji białka fuzyjnego EGFP3-Nup50 w komórkach.

Ta linia komórkowa jest szczególnie cenna dla badań koncentrujących się na transporcie nukleocytoplazmatycznym, dynamice kompleksu porów jądrowych i funkcjonalnej roli Nup50 w różnych procesach komórkowych. Komórki NRK-EGFP2-Nup50 są odpowiednie dla szeregu metod eksperymentalnych, w tym odzyskiwania fluorescencji po fotowybielaniu (FRAP), spektroskopii korelacji fluorescencji (FCS) i innych zaawansowanych technik mikroskopii. Badania te mogą zapewnić wgląd w molekularne mechanizmy transportu jądrowego i przyczynić się do zrozumienia chorób związanych z dysfunkcją transportu jądrowego, takich jak niektóre nowotwory i zaburzenia neurodegeneracyjne.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym