NRK-EGFP2-Nup50

NRK-EGFP2-Nup50 rakuliin on klonaalne stabiilne rakuliin, mis on saadud normaalsetest roti neerurakkudest (NRK). See rakuliin genereeriti ringikujulise plasmiidi transfektsiooni teel, mis sisaldas tõhustatud rohelise fluorestseeruva valgu (EGFP) ja nukleoporiini 50 (Nup50) fusioonivalgu geeni, millele järgnes ravimresistentsuse selektsioon. Selle tulemusena ekspresseerib ligikaudu 50% rakkudest EGFP3-Nup50 fusioonvalku, mis võimaldab Nup50 visualiseerimist ja jälgimist rakukeskkonnas.

Nup50 on tuumapoorikompleksi kriitiline komponent, mis vastutab molekulide transpordi reguleerimise eest tuuma ja tsütoplasma vahel. EGFP3-märgis võimaldab Nup50 lokaliseerimise, dünaamika ja interaktsioonide uurimiseks kasutada elusraku pildistamist ja muid fluorestsentsipõhiseid meetodeid. Vaatamata sellele, et NRK-EGFP2-Nup50 rakud on stabiilne rakuliin, esineb neis mõningane varieerumine, mis näitab, et EGFP3-Nup50 fusioonvalgu ekspressiooni tase on rakkude vahel erinev.

See rakuliin on eriti väärtuslik nukleotsütoplasmilise transpordi, tuumapoorikompleksi dünaamika ja Nup50 funktsionaalse rolli uurimiseks erinevates rakuprotsessides. NRK-EGFP2-Nup50 rakud sobivad mitmesuguste eksperimentaalsete lähenemisviiside jaoks, sealhulgas fluorestsentsuse taastumine pärast fotobleachingut (FRAP), fluorestsentskorrelatsioonispektroskoopia (FCS) ja muude täiustatud mikroskoopiatehnikate jaoks. Need uuringud võivad anda ülevaate tuuma transpordi molekulaarsetest mehhanismidest ja aidata kaasa tuuma transpordi häirega seotud haiguste, näiteks teatavate vähkkasvajate ja neurodegeneratiivsete häirete mõistmisele.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest