NRK-EGFP2-Nup50

A linha celular NRK-EGFP2-Nup50 é uma linha celular clonal estável derivada de células normais de rim de rato (NRK). Esta linha celular foi gerada através da transfecção de um plasmídeo circular que contém o gene que codifica a proteína de fusão da Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) e da Nucleoporina 50 (Nup50), seguida de uma seleção de resistência aos medicamentos. Como resultado, aproximadamente 50% das células expressam a proteína de fusão EGFP3-Nup50, o que permite a visualização e o rastreio da Nup50 no ambiente celular.

A Nup50 é um componente crítico do complexo do poro nuclear, responsável pela regulação do transporte de moléculas entre o núcleo e o citoplasma. A etiqueta EGFP3 permite a obtenção de imagens de células vivas e outras técnicas baseadas na fluorescência para estudar a localização, a dinâmica e as interações da Nup50. Apesar de ser uma linha celular estável, as células NRK-EGFP2-Nup50 apresentam alguma variegação, indicando variabilidade nos níveis de expressão da proteína de fusão EGFP3-Nup50 entre as células.

Esta linha celular é particularmente valiosa para a investigação centrada no transporte nucleocitoplasmático, na dinâmica do complexo do poro nuclear e no papel funcional da Nup50 em vários processos celulares. As células NRK-EGFP2-Nup50 são adequadas para uma série de abordagens experimentais, incluindo a recuperação de fluorescência após fotodegradação (FRAP), a espetroscopia de correlação de fluorescência (FCS) e outras técnicas avançadas de microscopia. Estes estudos podem fornecer informações sobre os mecanismos moleculares do transporte nuclear e contribuir para a compreensão de doenças associadas à disfunção do transporte nuclear, como certos cancros e doenças neurodegenerativas.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia