NRK-EGFP2-Nup50

La linea cellulare NRK-EGFP2-Nup50 è una linea cellulare clonale stabile derivata da cellule di rene normale di ratto (NRK). Questa linea cellulare è stata generata attraverso la trasfezione di un plasmide circolare contenente il gene che codifica la proteina di fusione di Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) e Nucleoporin 50 (Nup50), seguita dalla selezione della resistenza ai farmaci. Di conseguenza, circa il 50% delle cellule esprime la proteina di fusione EGFP3-Nup50, che consente la visualizzazione e il tracciamento di Nup50 nell'ambiente cellulare.

Nup50 è un componente critico del complesso del poro nucleare, responsabile della regolazione del trasporto di molecole tra il nucleo e il citoplasma. Il tag EGFP3 consente l'imaging di cellule vive e altre tecniche basate sulla fluorescenza per studiare la localizzazione, la dinamica e le interazioni di Nup50. Pur essendo una linea cellulare stabile, le cellule NRK-EGFP2-Nup50 presentano una certa variegatura, che indica la variabilità dei livelli di espressione della proteina di fusione EGFP3-Nup50 tra le cellule.

Questa linea cellulare è particolarmente preziosa per la ricerca sul trasporto nucleocitoplasmatico, sulla dinamica del complesso del poro nucleare e sul ruolo funzionale di Nup50 in vari processi cellulari. Le cellule NRK-EGFP2-Nup50 sono adatte a una serie di approcci sperimentali, tra cui il recupero della fluorescenza dopo il photobleaching (FRAP), la spettroscopia di correlazione della fluorescenza (FCS) e altre tecniche avanzate di microscopia. Questi studi possono fornire approfondimenti sui meccanismi molecolari del trasporto nucleare e contribuire alla comprensione delle malattie associate a disfunzioni del trasporto nucleare, come alcuni tumori e disturbi neurodegenerativi.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia