NRK-EGFP2-Nup50

La línea celular NRK-EGFP2-Nup50 es una línea celular clonal estable derivada de células renales normales de rata (NRK). Esta línea celular se generó mediante la transfección de un plásmido circular que contiene el gen que codifica la proteína de fusión de la proteína fluorescente verde mejorada (EGFP) y la nucleoporina 50 (Nup50), seguida de una selección por resistencia a fármacos. Como resultado, aproximadamente el 50 % de las células expresan la proteína de fusión EGFP3-Nup50, lo que permite visualizar y rastrear la Nup50 dentro del entorno celular.

La Nup50 es un componente fundamental del complejo de poros nucleares, responsable de regular el transporte de moléculas entre el núcleo y el citoplasma. La etiqueta EGFP3 permite la obtención de imágenes de células vivas y el uso de otras técnicas basadas en la fluorescencia para estudiar la localización, la dinámica y las interacciones de la Nup50. A pesar de ser una línea celular estable, las células NRK-EGFP2-Nup50 presentan cierta variabilidad, lo que indica diferencias en los niveles de expresión de la proteína de fusión EGFP3-Nup50 entre las células.

Esta línea celular es particularmente valiosa para investigaciones enfocadas en el transporte nucleocitoplasmático, la dinámica del complejo de poros nucleares y el papel funcional de Nup50 en diversos procesos celulares. Las células NRK-EGFP2-Nup50 son adecuadas para una amplia gama de enfoques experimentales, incluyendo la recuperación de fluorescencia tras fotoblanqueo (FRAP), la espectroscopia de correlación de fluorescencia (FCS) y otras técnicas avanzadas de microscopía. Estos estudios pueden aportar información sobre los mecanismos moleculares del transporte nuclear y contribuir a la comprensión de enfermedades asociadas a la disfunción del transporte nuclear, como ciertos tipos de cáncer y trastornos neurodegenerativos.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.