NRK-EGFP2-Nup50

สายเซลล์ NRK-EGFP2-Nup50 เป็นสายเซลล์โคลนที่เสถียรซึ่งได้มาจากเซลล์ไตของหนูปกติ (NRK) สายเซลล์นี้ถูกสร้างขึ้นโดยการถ่ายโอนพลาสมิดวงแหวนที่มียีนซึ่งเข้ารหัสโปรตีนฟิวชันของโปรตีนเรืองแสงสีเขียวที่เพิ่มประสิทธิภาพ (EGFP) และ Nucleoporin 50 (Nup50) ตามด้วยการคัดเลือกความต้านทานต่อยาผลที่ได้คือ เซลล์ประมาณ 50% แสดงโปรตีนฟิวชั่น EGFP3-Nup50 ซึ่งช่วยให้สามารถมองเห็นและติดตาม Nup50 ภายในสภาพแวดล้อมของเซลล์ได้

Nup50 เป็นองค์ประกอบที่สำคัญของคอมเพล็กซ์รูพรุนนิวเคลียส ซึ่งมีหน้าที่ควบคุมการขนส่งของโมเลกุลระหว่างนิวเคลียสกับไซโทพลาสซึมแท็ก EGFP3 ช่วยให้สามารถถ่ายภาพเซลล์ที่มีชีวิตและเทคนิคที่ใช้การเรืองแสงอื่น ๆ เพื่อศึกษาการกระจายตัว, การเคลื่อนไหว, และการโต้ตอบของ Nup50 ได้ แม้ว่าจะเป็นสายเซลล์ที่เสถียร แต่เซลล์ NRK-EGFP2-Nup50 แสดงความหลากหลายบางประการ ซึ่งบ่งชี้ถึงความแปรปรวนในระดับการแสดงออกของโปรตีนฟิวชั่น EGFP3-Nup50 ในกลุ่มเซลล์

เซลล์ไลน์นี้มีคุณค่าอย่างยิ่งสำหรับการวิจัยที่มุ่งเน้นการขนส่งนิวเคลียสและไซโทพลาซึม, พลวัตของคอมเพล็กซ์รูพรุนนิวเคลียร์, และบทบาทการทำงานของ Nup50 ในกระบวนการเซลล์ต่าง ๆเซลล์ NRK-EGFP2-Nup50 เหมาะสำหรับการทดลองหลากหลายรูปแบบ รวมถึงการฟื้นฟูฟลูออเรสเซนซ์หลังการฟอกสีด้วยแสง (FRAP) การสเปกโทรสโกปีการสั่นพ้องของฟลูออเรสเซนซ์ (FCS) และเทคนิคกล้องจุลทรรศน์ขั้นสูงอื่นๆ การศึกษาเหล่านี้สามารถให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับกลไกระดับโมเลกุลของการขนส่งผ่านนิวเคลียสและมีส่วนช่วยในการทำความเข้าใจโรคที่เกี่ยวข้องกับความผิดปกติของการขนส่งผ่านนิวเคลียส เช่น มะเร็งบางชนิดและความผิดปกติทางระบบประสาทเสื่อมถอย

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.