NRK-EGFP2-Nup50

Az NRK-EGFP2-Nup50 sejtvonal egy normális patkányvese (NRK) sejtekből származó stabil klonális sejtvonal. Ezt a sejtvonalat az Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) és a Nucleoporin 50 (Nup50) fúziós fehérjét kódoló gént tartalmazó cirkuláris plazmid transzfekciójával, majd gyógyszerrezisztencia-szelekcióval hozták létre. Ennek eredményeként a sejtek körülbelül 50%-a expresszálja az EGFP3-Nup50 fúziós fehérjét, ami lehetővé teszi a Nup50 láthatóvá tételét és nyomon követését a sejtkörnyezetben.

A Nup50 a nukleáris pórus komplex kritikus összetevője, amely a sejtmag és a citoplazma közötti molekulák szállításának szabályozásáért felelős. Az EGFP3 tag lehetővé teszi az élő sejtek képalkotását és más fluoreszcencia-alapú technikákat a Nup50 lokalizációjának, dinamikájának és kölcsönhatásainak tanulmányozására. Annak ellenére, hogy az NRK-EGFP2-Nup50 sejtek stabil sejtvonalnak számítanak, némi variegációt mutatnak, ami az EGFP3-Nup50 fúziós fehérje expressziós szintjének változékonyságára utal a sejtek között.

Ez a sejtvonal különösen értékes a nukleocitoplazmatikus transzporttal, a nukleáris pórus komplex dinamikájával és a Nup50 különböző sejtfolyamatokban betöltött funkcionális szerepével foglalkozó kutatások számára. Az NRK-EGFP2-Nup50 sejtek számos kísérleti megközelítésre alkalmasak, beleértve a fluoreszcencia fotobleaching utáni helyreállítást (FRAP), a fluoreszcencia korrelációs spektroszkópiát (FCS) és más fejlett mikroszkópiai technikákat. Ezek a vizsgálatok betekintést nyújthatnak a nukleáris transzport molekuláris mechanizmusaiba, és hozzájárulhatnak a nukleáris transzport diszfunkciójával összefüggő betegségek, például egyes rákos megbetegedések és neurodegeneratív rendellenességek megértéséhez.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban