NRK-EGFP2-Nup50

NRK-EGFP2-Nup50-solulinja on normaaleista rotan munuaissoluista (NRK) peräisin oleva vakaa klooninen solulinja. Tämä solulinja on tuotettu transfektoimalla ympyränmuotoinen plasmidi, joka sisältää tehostetun vihreän fluoresoivan proteiinin (EGFP) ja nukleoporin 50:n (Nup50) fuusioproteiinia koodaavan geenin, minkä jälkeen on tehty lääkeresistenssivalinta. Tämän seurauksena noin 50 prosenttia soluista ilmentää EGFP3-Nup50-fuusioproteiinia, mikä mahdollistaa Nup50:n visualisoinnin ja seurannan soluympäristössä.

Nup50 on kriittinen komponentti ydinhuokoskompleksissa, joka on vastuussa molekyylien kuljetuksen säätelystä tuman ja sytoplasman välillä. EGFP3-tunniste mahdollistaa elävässä solussa tapahtuvan kuvantamisen ja muut fluoresenssiin perustuvat tekniikat Nup50:n lokalisoinnin, dynamiikan ja vuorovaikutusten tutkimiseksi. Vaikka NRK-EGFP2-Nup50-solut ovat vakaa solulinja, niissä on jonkin verran vaihtelua, mikä viittaa EGFP3-Nup50-fuusioproteiinin ilmentymistasojen vaihteluun solujen välillä.

Tämä solulinja on erityisen arvokas tutkimuksessa, jossa keskitytään nukleosytoplasmiseen kuljetukseen, ydinhuokoskompleksin dynamiikkaan ja Nup50:n toiminnalliseen rooliin eri soluprosesseissa. NRK-EGFP2-Nup50-solut soveltuvat erilaisiin kokeellisiin lähestymistapoihin, kuten fluoresenssin palautumiseen valohäviämisen jälkeen (FRAP), fluoresenssikorrelaatiospektroskopiaan (FCS) ja muihin kehittyneisiin mikroskopiatekniikoihin. Näillä tutkimuksilla voidaan saada tietoa ydinkuljetuksen molekyylimekanismeista ja edistää ydinkuljetuksen toimintahäiriöihin liittyvien sairauksien, kuten tiettyjen syöpien ja hermoston rappeutumishäiriöiden, ymmärtämistä.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa