NRK-EGFP2-Nup50
Cell line · Product number 500726
The NRK-EGFP2-Nup50 cell line is a clonal stable cell line derived from normal rat kidney (NRK) cells. This cell line was generated through the transfecti...
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01General information
- Description
NRK-EGFP2-Nup50 細胞系是一種源自正常大鼠腎臟(NRK)細胞的克隆穩定細胞系。 該細胞系是透過轉染一株含有編碼增強型綠色螢光蛋白(EGFP)與核孔蛋白 50(Nup50)融合蛋白之基因的環狀質體,並經藥物抗性篩選而建立。 結果顯示,約有 50% 的細胞表達 EGFP3-Nup50 融合蛋白,這使得在細胞環境中可對 Nup50 進行可視化與追蹤。
Nup50 是核孔複合體的關鍵組成部分,負責調節分子在細胞核與細胞質之間的運輸。EGFP3 標籤使研究人員能夠利用活細胞成像及其他基於螢光的技术,來研究 Nup50 的定位、動態及相互作用。 儘管屬於穩定細胞系,NRK-EGFP2-Nup50 細胞仍呈現一定程度的異質性,這表明各細胞間 EGFP3-Nup50 融合蛋白的表達水平存在差異。
此細胞系對於專注於核質運輸、核孔複合體動態,以及 Nup50 在各種細胞過程中的功能作用之研究,具有特別重要的價值。 NRK-EGFP2-Nup50 細胞適用於多種實驗方法,包括光漂白後螢光恢復 (FRAP)、螢光相關光譜 (FCS) 及其他先進的顯微鏡技術。 這些研究可深入探討核運輸的分子機制,並有助於理解與核運輸功能障礙相關的疾病,例如某些癌症和神經退行性疾病。
- Tissue
- 腎臟
- Synonyms
- NRK EGFP2-Nup50
02Classification
- Organism
- Rat
- Growth properties
- Adherent
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- 呈紡錘形的成纖維細胞樣細胞
04Identifiers
- Citation
- NRK-EGFP2-Nup50(Cytion 型號 500726)
- NCBI TaxID
- 10116
- Cellosaurus
- CVCL_AV93
- Depositor
- 艾倫伯格實驗室(EMBL)
05Expression and susceptibility
- Receptors expressed
- 表皮生長因子(EGF)、增殖刺激活性(MSA)
- Protein expression
- EGFP3-Nup50
- Products
- NUP50(核孔蛋白 50)
06Handling and culture
- Culture medium
- DMEM,含 4.5 g/L 葡萄糖、4 mM L-谷氨醯胺、3.7 g/L NaHCO₃ 及 1.0 mM 丙酮酸鈉(Cytion 產品編號 820300a)
- Incubation atmosphere
37°C,5% CO₂,加濕環境。
- Supplements
- 在培養基中加入 10% FBS 及 0.5 mg/mL G418
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- 倒掉舊培養基,並用PBS洗滌細胞。 加入新鮮配製並加熱至 37 攝氏度的 0.025% 胰蛋白酶/0.02% EDTA 溶液,並等待細胞脫落,此過程通常約需 5 分鐘。加入新鮮培養基以中和胰蛋白酶,然後將細胞混合物轉移至離心管中並進行離心。 離心後,倒去上清液,將細胞沉澱用新鮮培養基重懸,並將懸浮液轉移至新的培養瓶中。在培養基中加入 G418,使其最終濃度達到 0.5 mg/ml
- Seeding density
- 2 至 4 × 10⁴ 個細胞/cm²
- Fluid renewal
- 每週 2 至 3 次
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法,排除支原體污染的可能性。
為確保無細菌、真菌或酵母菌污染,每日均會對細胞培養物進行目視檢查。
- Freeze medium
- 作為冷凍保存培養基,我們使用完全生長培養基(含 FBS)+ 10% DMSO 以確保解凍後的存活率,或使用 CM-1 (Cytion 型號 800100),該培養基含有經優化的滲透保護劑和代謝穩定劑,可提升細胞恢復率並減輕冷凍誘導的壓力。
- Storage conditions
若需長期保存,請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前,可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中,作為短期過渡步驟。
- Shipping conditions
冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏,並裝於經驗證的隔熱包裝中,包裝內含有足夠的冷媒,以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後,請立即檢查容器,並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。
08Donor
- Breed / subspecies
- 奧斯本·門德爾
09Legal and safety
- Safety precautions
- 若計劃將低溫試管存放在液態氮中以供日後解凍,必須嚴格遵守相關安全措施。 必須穿戴適當的防護手套和防護服,且在將冷凍樣本移入或移出液氮罐時,必須佩戴口罩或安全護目鏡。此舉旨在降低因取出時冷凍試管可能發生爆炸而導致受傷的風險,此類爆炸可能造成尖銳碎片飛濺。
- Disclaimer
- 本產品所提供的細胞僅供體外實驗室研究之用,不得用於臨床或診斷用途,亦不得施予人類或用於獸醫用途。使用者必須遵守所有適用於研究環境中處理及使用這些細胞的相關指引與法規。
- Warranty
在 Cytion,我們對產品的品質與存活率提供保障。 我們保證,自本公司設施出貨後 60 天內,我們的細胞在培養開始時仍具存活能力。 我們保證所有材料均符合 分析證明書及/或產品說明書中所載的規格。
詳情請參閱我們的 《保固聲明》。
- Third-party agreements apply
- Yes
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