NRK-EGFP2-Nup50

NRK-EGFP2-Nup50-cellelinjen er en klonal, stabil cellelinje avledet fra normale rottenyreceller (NRK). Denne cellelinjen ble generert ved transfeksjon av et sirkulært plasmid som inneholder genet som koder for fusjonsproteinet av Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) og Nucleoporin 50 (Nup50), etterfulgt av seleksjon for medikamentresistens. Resultatet er at omtrent 50 % av cellene uttrykker fusjonsproteinet EGFP3-Nup50, noe som gjør det mulig å visualisere og spore Nup50 i det cellulære miljøet.

Nup50 er en kritisk komponent i kjerneporekomplekset, som er ansvarlig for å regulere transporten av molekyler mellom kjernen og cytoplasmaet. EGFP3-taggen gjør det mulig å studere lokaliseringen, dynamikken og interaksjonene til Nup50 ved hjelp av levende celleavbildning og andre fluorescensbaserte teknikker. Til tross for at det er en stabil cellelinje, viser NRK-EGFP2-Nup50-cellene en viss variasjon, noe som tyder på at uttrykksnivået av EGFP3-Nup50-fusjonsproteinet varierer mellom cellene.

Denne cellelinjen er spesielt verdifull for forskning som fokuserer på nukleocytoplasmatisk transport, kjerneporekompleksets dynamikk og Nup50s funksjonelle rolle i ulike cellulære prosesser. NRK-EGFP2-Nup50-cellene er egnet for en rekke eksperimentelle tilnærminger, inkludert fluorescensgjenoppretting etter fotobleking (FRAP), fluorescenskorrelasjonsspektroskopi (FCS) og andre avanserte mikroskopiteknikker. Disse studiene kan gi innsikt i de molekylære mekanismene for kjernetransport og bidra til forståelsen av sykdommer som er forbundet med dysfunksjon i kjernetransporten, for eksempel visse kreftformer og nevrodegenerative lidelser.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring