Skip to content
MDCK-SIAT1
Tissue
כליה

Documents

MDCK-SIAT1

Cell line · Product number 602281

The MDCK-SIAT1 cell line is a modified version of the Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells, engineered to express higher levels of human 2,6-sialyltrans...

US$395.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
  • CoA
1

01General information

Description

קו התאים MDCK-SIAT1 הוא גרסה משופרת של תאי Madin-Darby Canine Kidney (MDCK), שהונדסו כדי לבטא רמות גבוהות יותר של 2,6-sialyltransferase (SIAT1) אנושי. אנזים זה אחראי על הוספת חומצה סיאלית בקשר אלפא-2,6 לגלקטוז בגליקופרוטאינים ובגליקוליפידים. השינוי בוצע כדי להגביר את הביטוי של חומצות סיאליות מקושרות אלפא-2,6, שהן הקולטנים העיקריים לנגיפי שפעת אנושיים. שיפור זה הוא קריטי, מכיוון שהוא הופך את תאי MDCK-SIAT1 לדומים יותר לאפיתל דרכי הנשימה האנושיות, שבו יש ריכוז גבוה של קולטנים אלה באופן טבעי. כתוצאה מכך, תאים אלה מציעים מודל פיזיולוגי רלוונטי יותר לחקר נגיפי שפעת אנושיים והאינטראקציות שלהם עם תרכובות אנטי-ויראליות פוטנציאליות.

אחד היישומים המשמעותיים של תאי MDCK-SIAT1 הוא בהערכת רגישות נגיפי השפעת למעכבי נוירמינידאז (NAIs), כגון אוסלטמיביר. בשל הנוכחות המוגברת של חומצות סיאליות מקושרות אלפא-2,6, תאי MDCK-SIAT1 מפגינים רגישות משופרת ל-NAIs בהשוואה לתאי MDCK שלא עברו שינוי. זה הופך אותם לכלי מצוין לזיהוי עמידות למחסנים אלה, במיוחד בבידודים קליניים של נגיפי שפעת אנושיים עם מספר מעברים נמוך. קו התאים MDCK-SIAT1 מאפשר מחקרים מדויקים יותר במבחנה על יעילות התרופות והאינטראקציות עם קולטני הנגיף, ומספק תובנות חשובות על פיתוח טיפולים אנטי-ויראליים ומנגנוני עמידות.

Tissue
כליה

02Classification

Organism
Dog
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This canine epithelial kidney cell line (MDCK-SIAT1) contains a pcDNA3.1GS construct encoding human 2,6-sialyltransferase (SIAT1), enabling expression of human-like sialylation patterns. The insert is stably present in MDCK cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
2

03Characteristics

Morphology
אפיתל
Doubling time
21 עד 31 שעות

04Identifiers

Citation
MDCK-SIAT1 (מספר קטלוגי Cytion 602281)
NCBI TaxID
9615
Cellosaurus
CVCL_Z936

05Expression and susceptibility

Protein expression
הועבר עם ST6 בטא-גלקטוזיד אלפא-2,6-סיאלילטרנספראז 1 (ST6GAL1, SIAT1)

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתמיסה 10% FBS ו-1 מ"ג/מ"ל G418
Dissociation reagent
אקוטאז
Subculturing
הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
Seeding density
2 עד 4 x 104 תאים/סמ"ר
Fluid renewal
2 עד 3 פעמים בשבוע
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

08Donor

Breed / subspecies
קוקר ספנייל
Donor age
מבוגר