01General information
- Description
MDCK-SIAT1 细胞系是马丁-达比犬肾 (MDCK) 细胞的改良版，经改造后可表达更高水平的人类 2,6-硅氨酰基转移酶 (SIAT1)。这种酶负责在糖蛋白和糖脂上的半乳糖上添加α-2,6连接的硅醛酸。进行这种改造是为了增加α-2,6-连接的硅烷酸的表达，而硅烷酸是人类流感病毒的主要受体。这种提高是至关重要的，因为它使 MDCK-SIAT1 细胞与人类气道上皮细胞更加相似，而人类气道上皮细胞中天然就有大量此类受体。因此，这些细胞为研究人类流感病毒及其与潜在抗病毒化合物的相互作用提供了更贴近生理的模型。
MDCK-SIAT1 细胞的重要应用之一是评估流感病毒对神经氨酸酶抑制剂（NAIs）（如奥司他韦）的敏感性。由于α-2,6-连接的硅酸增加，MDCK-SIAT1 细胞对 NAIs 的敏感性比未修饰的 MDCK 细胞高。这使它们成为检测对这些抑制剂耐药性的绝佳工具，尤其是在低通过数的人流感病毒临床分离株中。MDCK-SIAT1 细胞系可以更准确地进行药物疗效和病毒受体相互作用的体外研究，为抗病毒疗法的开发和耐药机制提供有价值的见解。
- Tissue
- 肾脏
02Classification
- Organism
- Dog
- Sex
- Female
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- GMO-S1
- GMO status details
- GMO-S1: This canine epithelial kidney cell line (MDCK-SIAT1) contains a pcDNA3.1GS construct encoding human 2,6-sialyltransferase (SIAT1), enabling expression of human-like sialylation patterns. The insert is stably present in MDCK cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosafety level
- 2
03Characteristics
- Morphology
- 上皮细胞
- Doubling time
- 21 至 31 小时
04Identifiers
- Citation
- MDCK-SIAT1（Cytion 目录号 602281）
- NCBI TaxID
- 9615
- Cellosaurus
- CVCL_Z936
05Expression and susceptibility
- Protein expression
- 转染 ST6 β-半乳糖苷α-2,6-苷基转移酶 1 (ST6GAL1, SIAT1)
06Handling and culture
- Culture medium
- DMEM，w：4.5 克/升葡萄糖，w：4 毫摩尔 L-谷氨酰胺，w：3.7 克/升 NaHCO3，w：1.0 毫摩尔丙酮酸钠（Cytion 编号 820300a）。
- Incubation atmosphere
37°C, 5%CO2, 加湿环境。
- Supplements
- 在培养基中添加 10% FBS 和 1mg/ml G418
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- 去除粘附细胞上的旧培养基，用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS，T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞，T25 烧瓶用 1-2 毫升，T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟，使其分离。孵育后，用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬，然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。
- Seeding density
- 2至4×10⁴个细胞/平方厘米
- Fluid renewal
- 每周 2 至 3 次
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。
为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染，每天都要对细胞培养物进行目视检查。
- Freeze medium
- 我们使用完全生长培养基（包括 FBS）+10% DMSO 或 CM-1（Cytion 商品目录编号 800100）作为冷冻保存培养基，以获得足够的解冻后存活率，CM-1（Cytion 商品目录编号 800100）含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂，可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。
- Storage conditions
如需长期保存，可将样品瓶放入气相液氮中，温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。
- Shipping conditions
冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。
08Donor
- Breed / subspecies
- 可卡犬
- Donor age
- 成人
09Legal and safety
- Safety precautions
- 计划将低温样品储存在液氮中以便将来解冻时，必须遵守严格的安全措施。在将冷冻样本移入或移出液氮罐时，必须穿戴适当的防护手套和防护服，并使用面罩或安全护目镜。这样做是为了降低在移出时因冷冻样品爆炸而造成伤害的风险，因为爆炸可能导致锋利的碎片飞溅。
- Disclaimer
- 我们提供的细胞仅用于体外实验室研究目的，不用于临床或诊断用途，也不得用于人类或兽医目的。用户必须遵守在研究环境中处理和使用这些细胞的所有适用准则和法规。
- Warranty
在Cytion，我们保证产品的质量和活力。 我们保证，从我们的工厂发货后 60 天内，我们的细胞在开始培养时都是存活的。 我们保证所有材料均符合分析证书和/或产品说明书中描述的规格。
有关详细信息，请参阅我们的 <a href="" /Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">保修声明 。
- Material Transfer Agreement required
- Yes