01General information
- Description
La línea celular MDCK-SIAT1 es una versión modificada de las células renales caninas Madin-Darby (MDCK), diseñadas para expresar niveles más altos de 2,6-sialiltransferasa humana (SIAT1). Esta enzima es responsable de la adición de ácido siálico mediante un enlace alfa-2,6 a la galactosa en las glicoproteínas y los glicolípidos. La modificación se realizó para aumentar la expresión de los ácidos siálicos con enlace alfa-2,6, que son los receptores principales de los virus de la influenza humana. Esta mejora es fundamental, ya que hace que las células MDCK-SIAT1 sean más similares al epitelio de las vías respiratorias humanas, que naturalmente presenta una alta concentración de estos receptores. Como resultado, estas células ofrecen un modelo más relevante desde el punto de vista fisiológico para estudiar los virus de la influenza humana y sus interacciones con posibles compuestos antivirales.
Una de las aplicaciones más importantes de las células MDCK-SIAT1 es la evaluación de la sensibilidad del virus de la gripe a los inhibidores de la neuraminidasa (NAI), como el oseltamivir. Debido a la mayor presencia de ácidos siálicos con enlaces alfa-2,6, las células MDCK-SIAT1 muestran una mayor sensibilidad a los NAI en comparación con las células MDCK no modificadas. Esto las convierte en una excelente herramienta para detectar la resistencia a estos inhibidores, especialmente en aislados clínicos de virus de la gripe humana con bajo número de pases. La línea celular MDCK-SIAT1 permite realizar estudios in vitro más precisos sobre la eficacia de los fármacos y las interacciones con los receptores virales, lo que brinda información valiosa para el desarrollo de terapias antivirales y el estudio de los mecanismos de resistencia.
- Tissue
- Riñón
02Classification
- Organism
- Dog
- Sex
- Female
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- GMO-S1
- GMO status details
- GMO-S1: This canine epithelial kidney cell line (MDCK-SIAT1) contains a pcDNA3.1GS construct encoding human 2,6-sialyltransferase (SIAT1), enabling expression of human-like sialylation patterns. The insert is stably present in MDCK cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosafety level
- 2
03Characteristics
- Morphology
- Epithelial
- Doubling time
- De 21 a 31 horas
04Identifiers
- Citation
- MDCK-SIAT1 (número de catálogo de Cytion 602281)
- NCBI TaxID
- 9615
- Cellosaurus
- CVCL_Z936
05Expression and susceptibility
- Protein expression
- Transfectadas con la beta-galactosida alfa-2,6-sialiltransferasa 1 de ST6 (ST6GAL1, SIAT1)
06Handling and culture
- Culture medium
- DMEM, p/v: 4,5 g/L de glucosa, p/v: 4 mM de L-glutamina, p/v: 3,7 g/L de NaHCO₃, p/v: 1,0 mM de piruvato de sodio (número de artículo de Cytion 820300a)
- Incubation atmosphere
37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.
- Supplements
- Añade al medio un 10 % de FBS y 1 mg/ml de G418
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- Retira el medio usado de las células adheridas y lávalas con PBS sin calcio ni magnesio. Para los frascos T25, usa de 3 a 5 ml de PBS, y para los frascos T75, usa de 5 a 10 ml. Luego, cubra las células por completo con Accutase, utilizando de 1 a 2 ml para los frascos T25 y 2,5 ml para los frascos T75. Deje que las células se incuben a temperatura ambiente durante 8 a 10 minutos para desprenderse. Después de la incubación, mezcla suavemente las células con 10 ml de medio para resuspendarlas; luego, centrifuga a 300xg durante 3 minutos. Deseche el sobrenadante, resuspenda las células en medio fresco y transfiéralas a frascos nuevos que ya contengan medio fresco.
- Seeding density
- De 2 a 4 × 10⁴ células/cm²
- Fluid renewal
- De 2 a 3 veces por semana
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.
Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.
- Freeze medium
- Como medio de criopreservación, utilizamos un medio de crecimiento completo (que incluye FBS) + 10 % de DMSO para garantizar una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo de Cytion 800100), que incluye osmoprotectores y estabilizadores metabólicos optimizados para mejorar la recuperación y reducir el estrés inducido por la criopreservación.
- Storage conditions
Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.
- Shipping conditions
Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.
08Donor
- Breed / subspecies
- Cocker Spaniel
- Donor age
- Adulto
09Legal and safety
- Safety precautions
- Cuando se planea almacenar un criovial en nitrógeno líquido para su descongelación futura, es obligatorio cumplir con estrictas medidas de seguridad. Es esencial contar con guantes y ropa de protección adecuados, y se requiere el uso de una mascarilla o lentes de seguridad durante la transferencia de muestras congeladas hacia o desde el tanque de nitrógeno líquido. Esto tiene como objetivo mitigar el riesgo de lesiones por posibles explosiones de los criotubos al retirarlos, lo que puede provocar la proyección de fragmentos afilados.
- Disclaimer
- Nuestras células se proporcionan exclusivamente con fines de investigación de laboratorio in vitro y no están destinadas a uso clínico ni diagnóstico, ni deben administrarse a seres humanos ni utilizarse con fines veterinarios. Los usuarios deben cumplir con todas las directrices y regulaciones aplicables para la manipulación y el uso de estas células en un entorno de investigación.
- Warranty
En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.
Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.
- Material Transfer Agreement required
- Yes