01General information
- Description
MDCK-SIAT1 細胞系是 Madin-Darby 犬腎細胞（MDCK）的改良版本，經基因工程改造後可表達更高濃度的人類 2,6-唾液酸轉移酶（SIAT1）。 該酶負責將唾液酸以 α-2,6 鍵結方式添加至糖蛋白和糖脂上的半乳糖上。進行此基因改造的目的是為了增加 α-2,6 鍵結唾液酸的表達量，因為這些唾液酸是人類流感病毒的主要受體。 此項增強至關重要，因為它使 MDCK-SIAT1 細胞更接近人類氣道上皮組織——該組織天然便含有高濃度的此類受體。因此，這些細胞為研究人類流感病毒及其與潛在抗病毒化合物的相互作用，提供了一個更具生理相關性的模型。
MDCK-SIAT1 細胞的一項重要應用，在於評估流感病毒對神經氨酸酶抑制劑（NAIs，例如奧司他韋）的敏感性。 由於α-2,6-連結的唾液酸含量增加，相較於未經修飾的 MDCK 細胞，MDCK-SIAT1 細胞對 NAIs 展現出更高的敏感性。這使它們成為檢測對這些抑制劑產生抗藥性的絕佳工具，特別是在低傳代數的人類流感病毒臨床分離株中。 MDCK-SIAT1 細胞系可進行更精確的體外藥物功效及病毒受體相互作用研究，為抗病毒療法的開發及抗藥性機制提供寶貴的見解。
- Tissue
- 腎臟
02Classification
- Organism
- Dog
- Sex
- Female
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- GMO-S1
- GMO status details
- GMO-S1: This canine epithelial kidney cell line (MDCK-SIAT1) contains a pcDNA3.1GS construct encoding human 2,6-sialyltransferase (SIAT1), enabling expression of human-like sialylation patterns. The insert is stably present in MDCK cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosafety level
- 2
03Characteristics
- Morphology
- 上皮性
- Doubling time
- 21 至 31 小時
04Identifiers
- Citation
- MDCK-SIAT1（Cytion 型號 602281）
- NCBI TaxID
- 9615
- Cellosaurus
- CVCL_Z936
05Expression and susceptibility
- Protein expression
- 經 ST6 β-半乳糖苷酸 α-2,6-唾液酸轉移酶 1（ST6GAL1、SIAT1）轉染
06Handling and culture
- Culture medium
- DMEM，含 4.5 g/L 葡萄糖、4 mM L-谷氨醯胺、3.7 g/L NaHCO₃ 及 1.0 mM 丙酮酸鈉（Cytion 產品編號 820300a）
- Incubation atmosphere
37°C，5% CO₂，加濕環境。
- Supplements
- 在培養基中加入 10% FBS 及 1 mg/ml G418
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- 從貼壁細胞中移除舊培養基，並用不含鈣和鎂的PBS洗滌細胞。T25培養瓶使用3-5毫升PBS，T75培養瓶則使用5-10毫升。 接著，用 Accutase 完全覆蓋細胞，T25 培養瓶使用 1–2 毫升，T75 培養瓶則使用 2.5 毫升。將細胞於室溫下孵育 8–10 分鐘，使其脫附。 孵育後，將細胞與 10 毫升培養基輕柔混合以使其重新懸浮，然後以 300xg 離心 3 分鐘。棄去上清液，將細胞重新懸浮於新鮮培養基中，並轉移至已預先加入新鮮培養基的新培養瓶中。
- Seeding density
- 2 至 4 × 10⁴ 個細胞/cm²
- Fluid renewal
- 每週 2 至 3 次
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法，排除支原體污染的可能性。
為確保無細菌、真菌或酵母菌污染，每日均會對細胞培養物進行目視檢查。
- Freeze medium
- 作為冷凍保存培養基，我們使用完全生長培養基（含 FBS）+ 10% DMSO 以確保解凍後的存活率，或使用 CM-1 （Cytion 型號 800100），該培養基含有經優化的滲透保護劑和代謝穩定劑，可提升細胞恢復率並減輕冷凍誘導的壓力。
- Storage conditions
若需長期保存，請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前，可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中，作為短期過渡步驟。
- Shipping conditions
冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏，並裝於經驗證的隔熱包裝中，包裝內含有足夠的冷媒，以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後，請立即檢查容器，並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。
08Donor
- Breed / subspecies
- 可卡犬
- Donor age
- 成人
09Legal and safety
- Safety precautions
- 若計劃將低溫試管存放在液態氮中以供日後解凍，必須嚴格遵守相關安全措施。 必須穿戴適當的防護手套和防護服，且在將冷凍樣本移入或移出液氮罐時，必須佩戴口罩或安全護目鏡。此舉旨在降低因取出時冷凍試管可能發生爆炸而導致受傷的風險，此類爆炸可能造成尖銳碎片飛濺。
- Disclaimer
- 本產品所提供的細胞僅供體外實驗室研究之用，不得用於臨床或診斷用途，亦不得施予人類或用於獸醫用途。使用者必須遵守所有適用於研究環境中處理及使用這些細胞的相關指引與法規。
- Warranty
在 Cytion，我們對產品的品質與存活率提供保障。 我們保證，自本公司設施出貨後 60 天內，我們的細胞在培養開始時仍具存活能力。 我們保證所有材料均符合 分析證明書及／或產品說明書中所載的規格。
詳情請參閱我們的 《保固聲明》。
- Material Transfer Agreement required
- Yes