MNNG-HOS (CL #5)

A linhagem celular MNNG/HOS Cl #5 [R-1059-D] é derivada da linhagem celular de osteossarcoma humano HOS por meio de transformação in vitro com N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG) na concentração de 0,01 mcg/ml. Esse composto é um potente carcinógeno, e a transformação resultou em propriedades tumorigênicas significativas, evidenciadas pela formação de tumores em camundongos nude em até 21 dias, com frequência de 100%, quando inoculados por via subcutânea com 10^⁷ células. Observou-se que esses tumores eram sarcomas ou osteossarcomas pouco diferenciados. A linhagem celular foi originalmente estabelecida a partir de uma paciente branca de 13 anos com osteossarcoma e apresenta propriedades de crescimento aderente.

Funcionalmente, as células MNNG/HOS Cl #5 demonstram alta densidade de saturação e alta eficiência de plaqueamento em ágar mole, refletindo seu crescimento independente de ancoragem aprimorado, uma característica marcante da transformação maligna. Além disso, essas células exibem notável atividade fibrinolítica, que tem sido associada a um aumento do potencial tumorigênico. Quando comparadas às células HOS não tratadas, as células tratadas com MNNG exibem propriedades de agregação celular mais robustas e maior propensão a formar colônias em ágar mole, o que se correlaciona com suas capacidades de formação de tumores. Em experimentos, as células transformadas com MNNG produziram tumores tanto em camundongos nude quanto em hamsters, com células semelhantes à linhagem HOS parental, enquanto as células não tratadas não foram tumorigênicas em condições semelhantes.

Essa linhagem celular também é útil no estudo da progressão do câncer e da biologia tumoral, particularmente do osteossarcoma, pois fornece um modelo de transformação induzida quimicamente. A capacidade dessas células de crescer em um ambiente imunocomprometido (por exemplo, camundongos nude) as torna uma ferramenta valiosa para a pesquisa pré-clínica do câncer, permitindo a investigação de mecanismos tumorigênicos e o possível teste de intervenções terapêuticas.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.