Премини към съдържанието
LS174T
Тъкан
Дебело черво
Заболяване
Аденокарцином
Синоними
Ls174T, LS174t, Ls-174-T, LS-174-T, LS 174 T, LS174T, Ls-174T, LS 174T, LS-174, LS174

Документи

LS174T

Cell line · Номер на продукта 300392

The LS147T cell line is a variant of LS-180, both of which are derived from a Duke's type B adenocarcinoma of the colon in a 58-year-old White female pati...

€430.00без ДДС и доставка

Персонализиране / Препоръки

На склад
Лот
Препоръчани (най-новата партида)
  • CoA
1

01Обща информация

Описание

Клетъчната линия LS147T е вариант на LS-180, като и двете са получени от аденокарцином на дебелото черво тип В на Дюк при 58-годишна пациентка от бялата раса. Първоначалната линия LS-180 е създадена чрез култивиране на смляна туморна тъкан в продължение на 10 месеца. LS-147T, заедно с родителската си линия, се отличава с експресия на множество онкогени, включително myc, myb, ras и fos, като същевременно е отрицателна за други като sis, abl и ros. Тази линия също така експресира високи нива на карциноембрионален антиген (CEA), интерлевкин 6 (IL-6) и интерлевкин 10 (IL-10), които са важни маркери и потенциални цели в изследванията на колоректалния рак.

Тези клетки показват няколко ключови характеристики на епителните клетки на дебелото черво, включително обилни микровили и интрацитоплазмени муцинови вакуоли, които са характеристики, обикновено свързани със секреторните клетки в лигавицата на дебелото черво. Проучванията с електронна микроскопия потвърждават тези структурни детайли, което допълнително подкрепя техния произход и диференцировъчен статус. Важно е да се отбележи, че клетките LS-147T са туморогенни при имунодепривирани мишки, като постоянно произвеждат тумори при подкожно инокулиране с висока плътност на клетките, което потвърждава техния злокачествен потенциал.

Освен това клетъчната линия LS-147T е особено ценна за проучвания, насочени към молекулярните и имунологичните аспекти на колоректалния рак. Съобщава се, че тази линия се поддава по-лесно на субкултивиране в сравнение с родителската си линия LS-180, което я прави по-практичен избор за дългосрочни проучвания. Силното производство на CEA от тези клетки, което е значително по-високо от това на други утвърдени линии като HT-29, прави LS-147T критичен модел за разбиране на динамиката на туморните маркери и за проучване на целеви терапии при колоректалния рак.

Тъкан
Дебело черво
Заболяване
Аденокарцином
Синоними
  • Ls174T
  • LS174t
  • Ls-174-T
  • LS-174-T
  • LS 174 T
  • LS174T
  • Ls-174T
  • LS 174T
  • LS-174
  • LS174

02Класификация

Организъм
Човек
Секс
Женски
Свойства, свързани с растежа
Привърженик
Ниво на биологична безопасност
1

03Характеристики

Морфология
Подобни на епител
Туморогенен
Да, при голи мишки
Кариотип
45,x с липсваща една х-хромозома, но без други хромозомни аберации

04Идентификатори

Източник
LS174T (каталожен номер 300392 на Cytion)
Данъчен идентификационен номер в NCBI
9606
Целозавър
CVCL_1384

05Проява и предразположеност

Експресия на протеини
Антиген на дебелото черво 3 +, CEA +, p53 -, GFAP -, експресия на мРНК +
Експресия на антигена
HLA A2, B13, B50, кръвна група O
Изоензими
ADA, 1: G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, PGD, A, ES-D, 1, PEP-D, 1
Онкогени
Myc +, myb + , ras +, fos +, p53 +, sis -, abl -, ros -, src -
Мутационен профил
Клетките LS-174T носят мутация в кодон 12 на гена Kras: GGT(Wt Gly) >GAT(Asp)
Обратна транскриптаза
Отрицателен
Продукти
Карциноембрионален антиген (CEA) 1944 ng/106 клетки за 10 дни, муцин, интерлевкин-10 (IL-10), интерлевкин-6 (IL-6)

06Обработка и отглеждане

Хранителна среда
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamine, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (номер на статията в Cytion 820100a)
Атмосфера за инкубация

37°C, 5%CO2, овлажнена атмосфера.

Добавки
Допълнете средата с 10% FBS и 1% NEAA
Реагент за дисоциация
Accutase
Пресаждане
Отстранете старата среда от адхезивните клетки и ги промийте с PBS, която не съдържа калций и магнезий. За колби Т25 използвайте 3-5 ml PBS, а за колби Т75 - 5-10 ml. След това покрийте клетките изцяло с Accutase, като използвате 1-2 ml за колби Т25 и 2,5 ml за колби Т75. Оставете клетките да се инкубират на стайна температура за 8-10 минути, за да се отделят. След инкубацията внимателно разбъркайте клетките с 10 ml среда, за да ги ресуспендирате, след което центрофугирайте при 300xg за 3 минути. Изхвърлете супернатантата, ресуспендирайте клетките в прясна среда и ги прехвърлете в нови колби, които вече съдържат прясна среда.
Плътност на засяването
5 до 8 x 104 клетки/cm2
Обновяване на течността
2 до 3 пъти седмично
Възстановяване след размразяване
След размразяване, поставете клетките в плаки с плътност 5 x 104 клетки/cm2 и оставете клетките да се възстановят от процеса на замразяване и да се прикрепят за най-малко 24 часа.
Размразяване и култивиране
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Контрол на качеството и криоконсервация

Стерилност

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

Среда за замразяване
Като среда за криоконсервация използваме пълна среда за растеж (включително FBS) + 10% DMSO за адекватна жизнеспособност след размразяване или CM-1 (каталожен номер 800100 на Cytion), която включва оптимизирани осмопротектори и метаболитни стабилизатори за подобряване на възстановяването и намаляване на криоиндуцирания стрес.
Условия за съхранение

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Условия за доставка

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

08Дарител

Възраст на донора
58 години
Етническа принадлежност
Кавказки