Prejsť na obsah
LS174T
Tkanivo
Colon
Choroba
Adenokarcinóm
Synonymá
Ls174T, LS174t, Ls-174-T, LS-174-T, LS 174 T, LS174T, Ls-174T, LS 174T, LS-174, LS174

Dokumenty

LS174T

Cell line · Číslo výrobku 300392

The LS147T cell line is a variant of LS-180, both of which are derived from a Duke's type B adenocarcinoma of the colon in a 58-year-old White female pati...

€430.00bez DPH a poštovného

Prispôsobenie / Odporúčania

Na sklade
Lot
Odporúčané (najčerstvejšia várka)
  • CoA
1

01Všeobecné informácie

Popis

Bunková línia LS147T je variantom LS-180, pričom obe pochádzajú z adenokarcinómu hrubého čreva typu B Duke u 58-ročnej pacientky bielej pleti. Pôvodná línia LS-180 vznikla kultiváciou zomletého nádorového tkaniva počas 10 mesiacov. LS-147T sa spolu s materskou líniou vyznačuje expresiou viacerých onkogénov vrátane myc, myb, ras a fos, pričom je negatívna pre iné, ako sú sis, abl a ros. Táto línia tiež exprimuje vysoké hladiny karcinoembryonálneho antigénu (CEA), interleukínu 6 (IL-6) a interleukínu 10 (IL-10), čo sú dôležité markery a potenciálne ciele vo výskume kolorektálneho karcinómu.

Tieto bunky vykazujú niekoľko kľúčových charakteristík epitelových buniek hrubého čreva vrátane hojných mikroklkov a intracytoplazmatických mucínových vakuol, čo sú vlastnosti typické pre sekrečné bunky v sliznici hrubého čreva. Štúdie elektrónovej mikroskopie potvrdili tieto štrukturálne detaily, čo ďalej podporuje ich pôvod a diferenciačný status. Dôležité je, že sa ukázalo, že bunky LS-147T sú tumorogénne u imunodeficientných myší, pričom pri subkutánnej inokulácii vo vysokej hustote buniek neustále vytvárajú nádory, čo potvrdzuje ich malígny potenciál.

Okrem toho je bunková línia LS-147T mimoriadne cenná v štúdiách zameraných na molekulárne a imunologické aspekty kolorektálneho karcinómu. Uvádza sa, že táto línia sa v porovnaní so svojou materskou líniou LS-180 ľahšie subkultivuje, čo z nej robí praktickejšiu voľbu pre dlhodobé štúdie. Silná produkcia CEA týmito bunkami, ktorá je výrazne vyššia ako u iných zavedených línií, ako je HT-29, robí z LS-147T rozhodujúci model na pochopenie dynamiky nádorových markerov a skúmanie cielených terapií kolorektálneho karcinómu.

Tkanivo
Colon
Choroba
Adenokarcinóm
Synonymá
  • Ls174T
  • LS174t
  • Ls-174-T
  • LS-174-T
  • LS 174 T
  • LS174T
  • Ls-174T
  • LS 174T
  • LS-174
  • LS174

02Klasifikácia

Organizmus
Človek
Sex
Žena
Rastové vlastnosti
Prívrženec
Úroveň biologickej bezpečnosti
1

03Charakteristiky

Morfológia
Epitelu podobné
Tumorigenický
Áno, na nahých myšiach
Karyotyp
45,x s chýbajúcim jedným chromozómom x, ale bez iných chromozómových aberácií

04Identifikátory

Citácia
LS174T (katalógové číslo Cytion 300392)
Daňové identifikačné číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1384

05Prejav a náchylnosť

Expresia proteínov
Colon Antigen 3 +, CEA +, p53 -, GFAP -, expresia mRNA +
Expresia antigénu
HLA A2, B13, B50, krvná skupina O
Izoenzýmy
ADA, 1: G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, PGD, A, ES-D, 1, PEP-D, 1
Onkogény
Myc +, myb + , ras +, fos +, p53 +, sis -, abl -, ros -, src -
Mutčný profil
Bunky LS-174T nesú mutáciu v kodóne 12 génu Kras: GGT(Wt Gly) >GAT(Asp)
Reverzná transkriptáza
Negatívne
Produkty
Karcinoembryonálny antigén (CEA) 1944 ng/106 buniek za 10 dní, mucín, interleukín-10 (IL-10), interleukín-6 (IL-6)

06Manipulácia a kultivácia

Kultivačné médium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamín, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion číslo článku 820100a)
Inkubačná atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplnky stravy
Doplňte médium o 10% FBS a 1% NEAA
Disociačné činidlo
Accutase
Rozmnožovanie kultúr
Odstráňte staré médium z adherovaných buniek a premyte ich PBS, ktorý neobsahuje vápnik a horčík. Pre banky T25 použite 3 - 5 ml PBS a pre banky T75 použite 5 - 10 ml. Potom bunky úplne pokryte Accutase, pričom použite 1 - 2 ml pre banky T25 a 2,5 ml pre banky T75. Nechajte bunky inkubovať pri izbovej teplote 8-10 minút, aby sa oddelili. Po inkubácii jemne premiešajte bunky s 10 ml média, aby boli znovu suspendované, a potom ich 3 minúty odstreďujte pri 300xg. Supernatant zlikvidujte, bunky znovu rozmiešajte v čerstvom médiu a preneste ich do nových fliaš, ktoré už obsahujú čerstvé médium.
Hustota výsevu
5 až 8 x 104 buniek/cm2
Obnova kvapaliny
2 až 3-krát týždenne
Zotavenie po rozmrazení
Po rozmrazení naneste bunky v koncentrácii 5 x 104 buniek/cm2 a nechajte bunky zotaviť sa z procesu zmrazenia a prilnúť aspoň 24 hodín.
Rozmrazovanie a kultivácia
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervácia

Sterilita

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Mrazové médium
Ako kryokonzervačné médium používame kompletné rastové médium (vrátane FBS) + 10 % DMSO na zabezpečenie primeranej životaschopnosti po rozmrazení alebo CM-1 (katalógové číslo 800100 spoločnosti Cytion), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie obnovy a zníženie stresu spôsobeného kryo.
Podmienky skladovania

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Dopravné podmienky

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

08Darca

Vek darcu
58 rokov
Etnická príslušnosť
Kaukazský