Ga naar de inhoud
LS174T
Weefsel
Kolon
Ziekte
Adenocarcinoom
Synoniemen
Ls174T, LS174t, Ls-174-T, LS-174-T, LS 174 T, LS174T, Ls-174T, LS 174T, LS-174, LS174

Documenten

LS174T

Cell line · Productnummer 300392

The LS147T cell line is a variant of LS-180, both of which are derived from a Duke's type B adenocarcinoma of the colon in a 58-year-old White female pati...

€430.00excl. btw en verzendkosten

Maatwerk / Aanbevelingen

Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
  • CoA
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De LS147T-cellijn is een variant van LS-180, die beide zijn afgeleid van een Duke's type B-adenocarcinoom van de dikke darm bij een 58-jarige blanke vrouwelijke patiënt. De oorspronkelijke LS-180 lijn werd gecreëerd door het gehakte tumorweefsel gedurende 10 maanden te kweken. LS-147T, samen met de ouderlijn, valt op door de expressie van meerdere oncogenen waaronder myc, myb, ras en fos, terwijl het negatief is voor andere zoals sis, abl en ros. Deze lijn brengt ook hoge niveaus van carcinoembryonisch antigeen (CEA), interleukine 6 (IL-6) en interleukine 10 (IL-10) tot expressie, wat belangrijke markers en potentiële doelwitten zijn in onderzoek naar colorectale kanker.

Deze cellen vertonen verschillende belangrijke kenmerken van colonepitheelcellen, waaronder overvloedige microvilli en intracytoplasmatische mucinevacuolen, kenmerken die typisch geassocieerd worden met afscheidingscellen in het colonmucosa. Elektronenmicroscopische studies hebben deze structurele details bevestigd, wat hun oorsprong en differentiatiestatus verder ondersteunt. Belangrijk is dat is aangetoond dat LS-147T cellen tumorigenic zijn in muizen met immunodeprivatie en consistent tumoren produceren wanneer ze subcutaan worden geïnoculeerd bij hoge celdichtheden.

Bovendien is de LS-147T cellijn bijzonder waardevol in studies die zich richten op de moleculaire en immunologische aspecten van colorectale kanker. Er is gerapporteerd dat deze lijn gemakkelijker te subkweken is in vergelijking met de ouderlijn, LS-180, waardoor het een meer praktische keuze is voor langetermijnstudies. De robuuste productie van CEA door deze cellen, die aanzienlijk hoger is dan die van andere gevestigde lijnen zoals HT-29, maakt LS-147T tot een cruciaal model voor het begrijpen van de dynamiek van tumormarkers en het onderzoeken van doelgerichte therapieën voor colorectale kanker.

Weefsel
Kolon
Ziekte
Adenocarcinoom
Synoniemen
  • Ls174T
  • LS174t
  • Ls-174-T
  • LS-174-T
  • LS 174 T
  • LS174T
  • Ls-174T
  • LS 174T
  • LS-174
  • LS174

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtig
Tumorverwekkend
Ja, in naakte muizen
Karyotype
45,x met een ontbrekend x-chromosoom maar geen andere chromosoomafwijkingen

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
LS174T (Cytion catalogusnummer 300392)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_1384

05Expressie en vatbaarheid

Eiwit-expressie
Colonantigeen 3 +, CEA +, p53 -, GFAP -, mRNA-expressie +
Antigeenexpressie
HLA A2, B13, B50, Bloedgroep O
Iso-enzymen
ADA, 1: G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, PGD, A, ES-D, 1, PEP-D, 1
Oncogenen
Myc +, myb + , ras +, fos +, p53 +, sis -, abl -, ros -, src -
Mutatieprofiel
LS-174T-cellen dragen een mutatie in codon 12 van het Kras-gen: GGT(Wt Gly) >GAT(Asp)
Reverse transcriptase
Negatief
Producten
Carcinoembryonaal antigeen (CEA) 1944 ng/106 cellen in 10 dagen, mucine, interleukine-10 (IL-10), interleukine-6 (IL-6)

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamine, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion artikelnummer 820100a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS en 1% NEAA
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Zaaidichtheid
5 tot 8 x 104 cellen/cm2
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Herstel na ontdooiing
Na ontdooien, de cellen op een plaat aanbrengen met een dichtheid van 5 x 104 cellen/cm2 en de cellen minstens 24 uur laten herstellen van het invriesproces en zich hechten.
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
58 jaar
Etnische afkomst
Kaukasisch