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LS174T
Pañuelo de papel
Colon
Enfermedad
Adenocarcinoma
Sinónimos
Ls174T, LS174t, Ls-174-T, LS-174-T, LS 174 T, LS174T, Ls-174T, LS 174T, LS-174, LS174

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LS174T

Cell line · Número de producto 300392

The LS147T cell line is a variant of LS-180, both of which are derived from a Duke's type B adenocarcinoma of the colon in a 58-year-old White female pati...

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01Información general

Descripción

La línea celular LS147T es una variante de la LS-180, ambas derivadas de un adenocarcinoma de colon tipo B de Duke en una paciente blanca de 58 años. La línea LS-180 original se estableció cultivando el tejido tumoral picado durante 10 meses. LS-147T, junto con su línea parental, destaca por su expresión de múltiples oncogenes, incluidos myc, myb, ras y fos, mientras que es negativa para otros como sis, abl y ros. Esta línea también expresa altos niveles de antígeno carcinoembrionario (CEA), interleucina 6 (IL-6) e interleucina 10 (IL-10), que son marcadores importantes y objetivos potenciales en la investigación del cáncer colorrectal.

Estas células presentan varias características clave de las células epiteliales colónicas, como abundantes microvellosidades y vacuolas intracitoplasmáticas de mucina, características típicamente asociadas a las células secretoras de la mucosa colónica. Los estudios de microscopía electrónica han confirmado estos detalles estructurales, apoyando aún más su origen y estado de diferenciación. Es importante destacar que las células LS-147T han demostrado ser tumorigénicas en ratones inmunodeprimidos, produciendo tumores de forma consistente cuando se inoculan por vía subcutánea a altas densidades celulares, afirmando así su potencial maligno.

Además, la línea celular LS-147T es especialmente valiosa en estudios centrados en los aspectos moleculares e inmunológicos del cáncer colorrectal. Se ha informado de que esta línea es más fácil de subcultivar en comparación con su línea parental, LS-180, lo que la convierte en una opción más práctica para estudios a largo plazo. La robusta producción de CEA por parte de estas células, que es significativamente superior a la de otras líneas establecidas como HT-29, convierte a LS-147T en un modelo crítico para comprender la dinámica de los marcadores tumorales y explorar terapias dirigidas en el cáncer colorrectal.

Pañuelo de papel
Colon
Enfermedad
Adenocarcinoma
Sinónimos
  • Ls174T
  • LS174t
  • Ls-174-T
  • LS-174-T
  • LS 174 T
  • LS174T
  • Ls-174T
  • LS 174T
  • LS-174
  • LS174

02Clasificación

Organismo
Humano
Sexo
Mujer
Propiedades de crecimiento
Adherente
Nivel de bioseguridad
1

03Características

Morfología
De tipo epitelial
Tumorigénico
Sí, en ratones desnudos
Cariotipo
45,x con ausencia de un cromosoma x pero sin otras aberraciones cromosómicas

04Identificadores

Referencia
LS174T (número de catálogo 300392 de Cytion)
N.º de identificación fiscal del NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1384

05Expresión y susceptibilidad

Expresión de proteínas
Antígeno de colon 3 +, CEA +, p53 -, GFAP -, expresión de ARNm +
Expresión de antígenos
HLA A2, B13, B50, grupo sanguíneo O
Isoenzimas
ADA, 1: G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, PGD, A, ES-D, 1, PEP-D, 1
Oncogenes
Myc +, myb + , ras +, fos +, p53 +, sis -, abl -, ros -, src -
Perfil mutacional
Las células LS-174T presentan una mutación en el codón 12 del gen Kras: GGT(Wt Gly) >GAT(Asp)
Transcriptasa inversa
Negativo
Productos
Antígeno carcinoembrionario (CEA) 1944 ng/106 células en 10 días, mucina, interleucina-10 (IL-10), interleucina-6 (IL-6)

06Manejo y cultivo

Medio de cultivo
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (número de artículo de Cytion 820100a)
Atmósfera de incubación

37°C, 5%CO2, atmósfera humidificada.

Suplementos
Suplementar el medio con un 10% de FBS y un 1% de NEAA
Reactivo de disociación
Accutase
Subcultivo
Retire el medio antiguo de las células adheridas y lávelas con PBS que carezca de calcio y magnesio. Para matraces T25, utilice 3-5 ml de PBS, y para matraces T75, utilice 5-10 ml. A continuación, cubra completamente las células con Accutase, utilizando 1-2 ml para matraces T25 y 2,5 ml para matraces T75. Deje incubar las células a temperatura ambiente durante 8-10 minutos para desprenderlas. Tras la incubación, mezclar suavemente las células con 10 ml de medio para resuspenderlas y, a continuación, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Desechar el sobrenadante, resuspender las células en medio fresco y transferirlas a nuevos matraces que ya contengan medio fresco.
Densidad de siembra
De 5 a 8 x 104 células/cm2
Renovación de fluidos
de 2 a 3 veces por semana
Recuperación tras la descongelación
Después de descongelar, siembre las células a 5 x 104 células/cm2 y deje que las células se recuperen del proceso de congelación y se adhieran durante al menos 24 horas.
Descongelación y cultivo
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Control de calidad y criopreservación

Esterilidad

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Medio de congelación
Como medio de criopreservación, utilizamos el medio de crecimiento completo (incluido FBS) + 10% DMSO para una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo 800100 de Cytion), que incluye osmoprotectores optimizados y estabilizadores metabólicos para mejorar la recuperación y reducir el estrés crioinducido.
Condiciones de almacenamiento

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Condiciones de envío

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

08Donante

Edad del donante
58 años
Origen étnico
Caucásico