Siirry sisältöön
LS174T
Kudos
Paksusuoli
Sairaus
Adenokarsinooma
Synonyymit
Ls174T, LS174t, Ls-174-T, LS-174-T, LS 174 T, LS174T, Ls-174T, LS 174T, LS-174, LS174

Asiakirjat

LS174T

Cell line · Tuotenumero 300392

The LS147T cell line is a variant of LS-180, both of which are derived from a Duke's type B adenocarcinoma of the colon in a 58-year-old White female pati...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

LS147T-solulinja on LS-180:n muunnos, ja molemmat solulinjat ovat peräisin 58-vuotiaan valkoihoisen naispotilaan paksusuolen B-tyypin adenokarsinoomasta. Alkuperäinen LS-180-solulinja perustettiin viljelemällä jauhettua kasvainkudosta 10 kuukauden ajan. LS-147T:n ja sen kantalinjan erityispiirteenä on useiden onkogeenien, kuten myc, myb, ras ja fos, ilmentyminen, kun taas muiden, kuten sis, abl ja ros, ilmentyminen on negatiivista. Tämä linja ilmentää myös runsaasti karsinoembryonista antigeenia (CEA), interleukiini 6:ta (IL-6) ja interleukiini 10:tä (IL-10), jotka ovat tärkeitä merkkiaineita ja potentiaalisia kohteita paksusuolisyövän tutkimuksessa.

Näillä soluilla on useita paksusuolen epiteelisolujen keskeisiä piirteitä, kuten runsaasti mikrovilloja ja sytoplasman sisäisiä mukiinityhjiöitä, jotka tyypillisesti liittyvät paksusuolen limakalvon erittäviin soluihin. Elektronimikroskooppitutkimukset ovat vahvistaneet nämä rakenteelliset yksityiskohdat, mikä tukee entisestään niiden alkuperää ja erilaistumista. Tärkeää on, että LS-147T-solujen on osoitettu olevan kasvaimia aiheuttavia immuunipuutteisilla hiirillä, ja ne tuottavat jatkuvasti kasvaimia, kun niitä inokuloidaan ihon alle suurilla solutiheyksillä, mikä vahvistaa niiden pahanlaatuisen potentiaalin.

Lisäksi LS-147T-solulinja on erityisen arvokas tutkimuksissa, joissa keskitytään kolorektaalisyövän molekulaarisiin ja immunologisiin näkökohtiin. On raportoitu, että tätä linjaa on helpompi subkulturoida verrattuna sen emolinjaan LS-180:een, mikä tekee siitä käytännöllisemmän valinnan pitkäaikaistutkimuksiin. Näiden solujen voimakas CEA-tuotanto, joka on huomattavasti suurempi kuin muilla vakiintuneilla linjoilla, kuten HT-29:llä, tekee LS-147T:stä ratkaisevan tärkeän mallin kasvainmerkkien dynamiikan ymmärtämisessä ja paksusuolen ja peräsuolen syövän kohdennettujen hoitojen tutkimisessa.

Kudos
Paksusuoli
Sairaus
Adenokarsinooma
Synonyymit
  • Ls174T
  • LS174t
  • Ls-174-T
  • LS-174-T
  • LS 174 T
  • LS174T
  • Ls-174T
  • LS 174T
  • LS-174
  • LS174

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Kasvaimia aiheuttava
Kyllä, alastomilla hiirillä
Karyotyyppi
45,x, jossa yksi x-kromosomi puuttuu, mutta ei muita kromosomipoikkeavuuksia

04Tunnisteet

Lähdeviite
LS174T (Cytionin luettelonumero 300392)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_1384

05Ilmentyminen ja alttius

Proteiinin ilmentyminen
Paksusuolen antigeeni 3 +, CEA +, p53 -, GFAP -, mRNA-ekspressio +
Antigeenin ilmentyminen
HLA A2, B13, B50, veriryhmä O
Isoentsyymit
ADA, 1: G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, PGD, A, ES-D, 1, PEP-D, 1
Onkogeenit
Myc +, myb + , ras +, fos +, p53 +, sis -, abl -, ros -, src -
Mutaatioprofiili
LS-174T-soluissa on mutaatio Kras-geenin koodonissa 12: GGT(Wt Gly) >GAT(Asp)
Käänteiskopioijaentsyymi
Negatiivinen
Tuotteet
Karsinoembryoninen antigeeni (CEA) 1944 ng/106 solua 10 päivässä, mukiini, interleukiini-10 (IL-10), interleukiini-6 (IL-6)

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiini, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytionin artikkelinumero 820100a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 % FBS:llä ja 1 % NEAA:lla
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
5–8 x 104 solua/cm2
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulamisen jälkeinen palautuminen
Sulattamisen jälkeen levitä solut 5 x 104 solua/cm2 ja anna solujen toipua pakastusprosessista ja kiinnittyä vähintään 24 tunnin ajan.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
58 vuotta
Etnisyys
Kaukasialainen