Pāriet uz saturu
LS174T
Audums
Resnās zarnas
Slimība
Adenokarcinoma
Sinonīmi
Ls174T, LS174t, Ls-174-T, LS-174-T, LS 174 T, LS174T, Ls-174T, LS 174T, LS-174, LS174

Dokumenti

LS174T

Cell line · Preces numurs 300392

The LS147T cell line is a variant of LS-180, both of which are derived from a Duke's type B adenocarcinoma of the colon in a 58-year-old White female pati...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

LS147T šūnu līnija ir LS-180 variants; abas ir iegūtas no 58 gadus vecas baltādainas pacientes, kurai bija Djūka B tipa resnās zarnas adenokarcinoma. Sākotnējā LS-180 līnija tika izveidota, 10 mēnešus kultivējot sasmalcinātus audzēja audus. LS-147T, tāpat kā tās vecākā līnija, izceļas ar vairāku onkogēnu, tostarp myc, myb, ras un fos, ekspresiju, bet citu, piemēram, sis, abl un ros, ekspresija ir negatīva. Šajā līnijā ir arī augsts karcīnoembrionālā antigēna (CEA), interleikīna 6 (IL-6) un interleikīna 10 (IL-10) līmenis, kas ir svarīgi marķieri un potenciālie mērķi kolorektālā vēža pētījumos.

Šīm šūnām piemīt vairākas svarīgākās resnās zarnas epitēlija šūnu pazīmes, tostarp bagātīgi mikroviļi un intracitoplazmas mucīna vakuolas, kas parasti ir raksturīgas resnās zarnas gļotādas sekrēcijas šūnām. Elektronmikroskopijas pētījumi ir apstiprinājuši šīs strukturālās detaļas, kas vēl vairāk apstiprina to izcelsmi un diferenciācijas statusu. Svarīgi ir tas, ka LS-147T šūnas ir pierādījušas, ka tās ir tumorogēnas imunitāti zaudējušām pelēm, un, injicējot zemādas šūnas ar lielu šūnu blīvumu, tās konsekventi rada audzējus, tādējādi apstiprinot to ļaundabīgo potenciālu.

Turklāt LS-147T šūnu līnija ir īpaši vērtīga pētījumos, kas vērsti uz kolorektālā vēža molekulārajiem un imunoloģiskajiem aspektiem. Ir ziņots, ka šo līniju ir vieglāk subkulturēt, salīdzinot ar tās vecāko līniju LS-180, tāpēc tā ir praktiskāka izvēle ilgtermiņa pētījumiem. Šo šūnu spēcīgā CEA produkcija, kas ir ievērojami augstāka nekā citās iedibinātās līnijās, piemēram, HT-29, padara LS-147T par ļoti svarīgu modeli audzēja marķieru dinamikas izpratnei un mērķtiecīgas terapijas izpētei kolorektālā vēža gadījumā.

Audums
Resnās zarnas
Slimība
Adenokarcinoma
Sinonīmi
  • Ls174T
  • LS174t
  • Ls-174-T
  • LS-174-T
  • LS 174 T
  • LS174T
  • Ls-174T
  • LS 174T
  • LS-174
  • LS174

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs
Tumorogēns
Jā, kailām pelēm
Kariotips
45,x ar vienas x hromosomas iztrūkumu, bet bez citām hromosomu novirzēm

04Identifikatori

Atsauce
LS174T (Cytion kataloga numurs 300392)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_1384

05Pazīmes un uzņēmība

Proteīnu ekspresija
Resnās zarnas antigēns 3 +, CEA +, p53 -, GFAP -, mRNS ekspresija +
Antigēna ekspresija
HLA A2, B13, B50, O asins grupa
Izoenzīmi
ADA, 1: G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, PGD, A, ES-D, 1, PEP-D, 1
Onkogēni
Myc +, myb + , ras +, fos +, p53 +, sis -, abl -, ros -, src -
Mutāciju profils
LS-174T šūnām ir mutācija Kras gēna 12. kodonā: GGT(Wt Gly) >GAT(Asp)
Reversā transkriptāze
Negatīvs
Produkti
Karcinoembrionālais antigēns (CEA) 1944 ng/106 šūnu 10 dienās, mucīns, interleikīns-10 (IL-10), interleikīns-6 (IL-6)

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-glutamīns, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion izstrādājuma numurs 820100a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS un 1% NEAA
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
5 līdz 8 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc atkausēšanas izkliedējiet šūnas uz šķīvja ar blīvumu 5 x 104 šūnas/cm2 un ļaujiet šūnām atgūties no sasaldēšanas procesa un pielipt vismaz 24 stundas.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
58 gadi
Etniskā piederība
Kaukāzietis