Preskoči na vsebino
LS174T
Tkivo
Debelo črevo
Bolezen
Adenokarcinom
Sinonimi
Ls174T, LS174t, Ls-174-T, LS-174-T, LS 174 T, LS174T, Ls-174T, LS 174T, LS-174, LS174

Dokumenti

LS174T

Cell line · Številka izdelka 300392

The LS147T cell line is a variant of LS-180, both of which are derived from a Duke's type B adenocarcinoma of the colon in a 58-year-old White female pati...

€430.00brez davka in stroškov poštnine
Na zalogi
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
  • CoA
1

01Splošne informacije

Opis

Celična linija LS147T je različica linije LS-180, obe pa sta pridobljeni iz adenokarcinoma debelega črevesa tipa B po Dukeu pri 58-letni beli bolnici. Izvirna linija LS-180 je bila vzpostavljena s kultivacijo razrezanega tumorskega tkiva 10 mesecev. LS-147T se skupaj z matično linijo odlikuje po izražanju številnih onkogenov, vključno z myc, myb, ras in fos, medtem ko je za druge, kot so sis, abl in ros, negativna. Ta linija izraža tudi visoko raven karcinoembrionalnega antigena (CEA), interlevkina 6 (IL-6) in interlevkina 10 (IL-10), ki so pomembni označevalci in potencialne tarče pri raziskavah kolorektalnega raka.

Te celice imajo več ključnih značilnosti epitelijskih celic debelega črevesa, vključno z obilnimi mikroviliji in intracitoplazemskimi mucinskimi vakuolami, ki so značilne za sekretorne celice v sluznici debelega črevesa. Študije elektronske mikroskopije so potrdile te strukturne podrobnosti, kar dodatno potrjuje njihov izvor in diferenciacijski status. Pomembno je, da so se celice LS-147T izkazale za tumorogene pri imunsko osiromašenih miših, pri čemer so ob subkutani inokulaciji z visoko gostoto celic dosledno proizvajale tumorje, kar potrjuje njihov maligni potencial.

Poleg tega je celična linija LS-147T še posebej dragocena v študijah, ki se osredotočajo na molekularne in imunološke vidike kolorektalnega raka. Poročali so, da je to linijo v primerjavi z matično linijo LS-180 lažje subkultivirati, zato je bolj praktična izbira za dolgoročne študije. Zaradi močne proizvodnje CEA v teh celicah, ki je bistveno višja kot pri drugih uveljavljenih linijah, kot je HT-29, je LS-147T pomemben model za razumevanje dinamike tumorskih označevalcev in raziskovanje ciljnih terapij pri kolorektalnem raku.

Tkivo
Debelo črevo
Bolezen
Adenokarcinom
Sinonimi
  • Ls174T
  • LS174t
  • Ls-174-T
  • LS-174-T
  • LS 174 T
  • LS174T
  • Ls-174T
  • LS 174T
  • LS-174
  • LS174

02Razvrstitev

Organizem
Človek
Seks
Ženska
Lastnosti rasti
Pripadnik
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Epitelijam podobni
Tumorigeničen
Da, na golih miših
Kariotip
45,x z manjkajočim kromosomom x, vendar brez drugih kromosomskih aberacij

04Identifikatorji

Navajanje vira
LS174T (kataloška številka Cytion 300392)
Davčna identifikacijska številka NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1384

05Izražanje in dovzetnost

Ekspresija beljakovin
Antigen debelega črevesa 3 +, CEA +, p53 -, GFAP -, ekspresija mRNA +
Ekspresija antigena
HLA A2, B13, B50, krvna skupina O
Izoenzimi
ADA, 1: G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, PGD, A, ES-D, 1, PEP-D, 1
Onkogeni
Myc +, myb + , ras +, fos +, p53 +, sis -, abl -, ros -, src -
Profil mutacij
Celice LS-174T imajo mutacijo v kodonu 12 gena Kras: GGT(Wt Gly) >GAT(Asp)
Reversna transkriptaza
Negativni
Izdelki
Karcinoembrionalni antigen (CEA) 1944 ng/106 celic v 10 dneh, mucin, interlevkin-10 (IL-10), interlevkin-6 (IL-6)

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (številka izdelka Cytion 820100a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 10 % FBS in 1 % NEAA
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Gostota setve
5 do 8 x 104 celic/cm2
Obnova tekočine
2 do 3-krat na teden
Obnova po odtaljevanju
Po odmrzovanju celice razporedite na ploščo v gostoti 5 x 104 celic/cm2 in jim pustite, da si opomorejo od zamrzovanja in se prilepijo na ploščo, vsaj 24 ur.
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Starost darovalca
58 let
Etnična pripadnost
Kavkaški