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HuH7-Zellen
Gewebe
Leber
Krankheit
Hepatozelluläres Karzinom
Metastasenherd
Hepatom
Synonyme
HuH-7, HUH-7, Huh-7, Huh7, HUH7, HUH7.0, JTC-39, Japanese Tissue Culture-39

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HuH7-Zellen

Cell line · Artikelnummer 300156

HuH-7-Zellen sind eine epithelähnliche, tumorogene Zelllinie, die ursprünglich 1982 aus einem Lebertumor eines 57-jährigen japanischen Mannes gewonnen wurde. Die menschliche Leber…

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

HuH-7-Zellen sind eine Art epithelialer, tumorigener Zelllinie, die ursprünglich 1982 aus einem Lebertumor eines 57-jährigen Japaners gewonnen wurde. Die aus einem menschlichen Hepatom gewonnene HuH-7-Zelllinie und ihre Derivate werden in der Forschung häufig als praktischer experimenteller Ersatz für primäre Hepatozyten verwendet. Insbesondere haben sie in der Hepatitis-C-Forschung eine wichtige Rolle gespielt und wurden als Wirtszellen für die In-vitro-Vermehrung des Virus verwendet. HuH-7-Zellen haben in der Hepatitis-C-Forschung eine entscheidende Rolle gespielt, insbesondere bei der Entwicklung von Medikamenten. Vor 2005 war es den Forschern nicht möglich, das Hepatitis-C-Virus im Labor zu kultivieren, was es schwierig machte, potenzielle Arzneimittelkandidaten gegen das Virus zu testen.

Mit der Einführung der HuH-7-Zelllinie änderte sich dies. Diese Zellen sind für die Replikation des Hepatitis-C-Virus sehr empfänglich und eignen sich daher ideal für In-vitro-Tests. Mit Hilfe der HuH-7-Zellen konnten die Forscher Wirkstoffkandidaten gegen im Labor gezüchtete Hepatitis C testen, was den Weg für die Entwicklung neuer Medikamente zur Bekämpfung des Virus ebnete. Im Gegensatz zu anderen etablierten menschlichen Hepatomzelllinien können HuH-7-Zellen in einem chemisch definierten Medium vermehrt werden, das anstelle von Serum Spuren von Selen enthält. Dies ermöglicht die systematische Untersuchung der In-vitro-Wirkungen verschiedener Verbindungen auf ihr Wachstum und ihren Stoffwechsel.

Gewebe
Leber
Krankheit
Hepatozelluläres Karzinom
Metastasenherd
Hepatom
Synonyme
  • HuH-7
  • HUH-7
  • Huh-7
  • Huh7
  • HUH7
  • HUH7.0
  • JTC-39
  • Japanese Tissue Culture-39

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Tumorauslösend
Ja, an nackten Mäusen.
Verdopplungszeit
48 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
HuH7 (Cytion Katalognummer 300156)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_0336

05Expression und Anfälligkeit

Viren
Negativ für HPV, HCV und HIV.

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
1 bis 2 x 104 Zellen/cm² während der routinemäßigen Zellkultur
Flüssigkeitswechsel
Alle 3 Tage
Erholung nach dem Auftauen
Beginnen Sie die Kultur mit 2 bis 3 x 104 Zellen/cm2. Die Zellen erholen sich innerhalb von 24 bis 48 Stunden.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
57 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Japanisch