Mine otse sisu juurde
HuH7 rakud
Kude
Maksa
Haigus
Hepatotsellulaarne kartsinoom
Metastaaside asukoht
Hepatoom
Sünonüümid
HuH-7, HUH-7, Huh-7, Huh7, HUH7, HUH7.0, JTC-39, Japanese Tissue Culture-39

Dokumendid

HuH7 rakud

Cell line · Toote number 300156

HuH-7 rakud on epiteelilaadsed, kasvajate tekitavad rakuliinid, mis võeti esmakordselt 1982. aastal 57-aastaselt jaapani mehe maksakasvajast. Inimese maks...

€650.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HuH-7 rakud on teatud tüüpi epiteelilaadne, kasvajaline rakuliin, mis võeti algselt 1982. aastal 57-aastase jaapani mehe maksakasvajast. Inimese hepatoomist saadud HuH-7 rakuliini ja selle derivaate on teadusuuringutes laialdaselt kasutatud primaarsete hepatotsüütide mugava eksperimentaalse asendajana. Eelkõige on need olnud olulised C-hepatiidi uurimisel ja neid on kasutatud peremeesrakkudena viiruse in vitro paljundamisel. HuH-7 rakud on mänginud olulist rolli C-hepatiidi uuringutes, eriti ravimite väljatöötamisel. Enne 2005. aastat ei olnud teadlastel võimalik C-hepatiidi viirust laboris kasvatada, mis raskendas potentsiaalsete ravimikandidaatide testimist selle vastu.

HuH-7 rakuliini kasutuselevõtt muutis seda. Need rakud on C-hepatiidi viiruse paljunemise suhtes väga tolerantsed, mistõttu on nad ideaalsed in vitro testimiseks. HuH-7 rakke kasutades suutsid teadlased sõeluda ravimikandidaate laboris kasvatatud C-hepatiidi vastu, mis sillutas teed uute ravimite väljatöötamisele viiruse vastu võitlemiseks. Erinevalt teistest väljakujunenud inimese hepatoomi rakuliinidest saab HuH-7 rakke paljundada keemiliselt määratletud keskkonnas, mis sisaldab seerumi asemel jälgi seleenist. See võimaldab süstemaatiliselt uurida erinevate ühendite in vitro mõju nende kasvule ja ainevahetusele.

Kude
Maksa
Haigus
Hepatotsellulaarne kartsinoom
Metastaaside asukoht
Hepatoom
Sünonüümid
  • HuH-7
  • HUH-7
  • Huh-7
  • Huh7
  • HUH7
  • HUH7.0
  • JTC-39
  • Japanese Tissue Culture-39

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Mees
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed
Tuumorigeenne
Jah, alasti hiirtel.
Kahekordistumisaeg
48 tundi

04Tunnused

Viide
HuH7 (Cytioni katalooginumber 300156)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_0336

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Viirused
Negatiivne HPV, HCV ja HIV suhtes.

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilne glutamiin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820700a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
1 kuni 2 x 104 rakku/cm2 tavalise rakukultuuri puhul
Vedeliku vahetus
Iga 3 päeva tagant
Taastumine pärast sulamist
Alustage kultuuri kasvatamist, kasutades 2–3 x 104 rakku/cm2. Rakud taastuvad 24–48 tunni jooksul.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
57 aastat
Etniline kuuluvus
Jaapani