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C2C12
Gewebe
Muskeln
Synonyme
C2c12, C2-C12, C12

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C2C12

Cell line · Artikelnummer 400476

The C2C12 cell line, an immortalized mouse myoblast cell line derived from the thigh muscle of a 2-month-old mouse of the C3H mouse strain, is extensively...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die C2C12-Zelllinie, eine immortalisierte Myoblastenzelllinie der Maus, die aus dem Oberschenkelmuskel einer 2 Monate alten Maus des C3H-Mausstamms gewonnen wird, wird aufgrund ihrer einzigartigen Zelldifferenzierungseigenschaften in der biomedizinischen Forschung häufig verwendet. C2C12-Myoblastenzellen proliferieren schnell und weisen unter Hochserumbedingungen typische Myoblasteneigenschaften auf. Beim Wechsel zu Bedingungen mit niedrigem Serumgehalt oder bei Hungersnöten beginnen die C2C12-Zellen mit der myogenen Differenzierung und wandeln sich in Myotubes um, die Vorläufer der kontraktilen Skelettmuskelzellen sind.

C2C12-Zellen nehmen exogene cDNA und Nukleinsäuren durch Transfektion leicht auf, was sie zu einer guten Wahl für Genexpressionsstudien und Untersuchungen zur Differenzierung von Myoblasten und Myotubes macht. Der Differenzierungsprozess ist gekennzeichnet durch die Expression myogener Marker wie Myf5, MyoD, Myogenin und Mrf4 sowie muskelspezifischer Marker wie Csrp3 und Mef2a, die bei der Untersuchung verschiedener Muskelphänotypen und der Skelettmuskelregeneration von wesentlicher Bedeutung sind.

Die einzigartige Form der C2C12-Myoblasten und ihre Umwandlung in Myoblasten-Zellringe und anschließend in reife Myotubes in serumgesättigten Medien unterstreichen die dynamische Natur dieser Zellen und ihr Potenzial für die Skelettmuskelforschung.

Forscher verwenden Substrate wie Gelatine-Hydrogele für C2C12-Zellkulturen, um In-vivo-Muskelbedingungen zu simulieren, was detaillierte Studien der Muskelzellentwicklung und der Auswirkungen der extrazellulären Matrix ermöglicht. Die Erstellung von Stoffwechselprofilen gibt wichtige Einblicke in die an der Muskelbildung und -erholung beteiligten Stoffwechselwege, wobei der Schwerpunkt auf wesentlichen Proteinen und der Rolle von Kalzium bei der Kontraktion liegt. Gen-Silencing-Techniken beleuchten den Differenzierungsprozess weiter und heben die Bedeutung der SMAD1-Phosphorylierung bei der Muskelregeneration hervor, die für das Verständnis der Erholung bei Muskelschwund und -verletzungen entscheidend ist.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die C2C12-Zelllinie ein wichtiges Instrument im Bereich der biomedizinischen Forschung darstellt, das eine vielseitige Plattform für die Erforschung der Feinheiten der Muskelbildung, der Differenzierung, der Genexpression und der tiefgreifenden Auswirkungen verschiedener Faktoren auf die Skelettmuskelzelllinie bietet, einschließlich der zentralen Rolle der Myofilamente, der Intermediärfilamentproteine und des gesamten organismischen Kontexts, in dem sich diese zellulären Prozesse entfalten.

Gewebe
Muskeln
Anwendungen
Transfektionswirt
Synonyme
  • C2c12
  • C2-C12
  • C12

02Klassifizierung

Organismus
Maus
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Myoblastenähnlich
Zelltyp
Myoblasten
Verdopplungszeit
24 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
C2C12 (Cytion Katalognummer 400476)
NCBI-Steuer-ID
10090
Cellosaurus
CVCL_0188

05Handhabung und Kultur

Nährmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
1 x 104 Zellen/cm² ergeben in etwa 4 Tagen eine konfluente Schicht.
Flüssigkeitswechsel
Alle 3 bis 5 Tage
Erholung nach dem Auftauen
Nach dem Auftauen die Zellen mit einer Dichte von 5 x 104 Zellen/cm² ausplattieren und die Zellen mindestens 24 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und adhärieren lassen.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

07Spender

Rasse / Unterart
C3H
Alter des Spenders
2 Monate