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RBL-2H3
Gewebe
Peripheres Blut
Krankheit
Leukämie bei Ratten
Synonyme
RBL2H3, RBL 2H3, RBL.2H3

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RBL-2H3

Cell line · Artikelnummer 305194

The RBL-2H3 cell line has become a valuable tool for studying mast cell physiology. RBL-2H3 cells express rat mast cell protease II (RMCP-II) and the c-ki...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die RBL-2H3-Zelllinie hat sich zu einem wertvollen Instrument für die Untersuchung der Mastzellphysiologie entwickelt. RBL-2H3-Zellen exprimieren die Rattenmastzellprotease II (RMCP-II) und die c-kit-Rezeptortyrosinkinase, was sie zu einem potenziellen Modell für Mastzellen macht. Es wurden jedoch widersprüchliche und manchmal irreführende Daten über RBL-2H3-Zellen berichtet.

RBL-2H3-Zellen wurden in großem Umfang zur Untersuchung verschiedener Aspekte der Mastzellfunktion verwendet, darunter Degranulation, Mastzellstabilisatoren und die Interaktion von FceRI-Rezeptoren mit dem Zytoskelett. Sie exprimieren hochaffine IgE-Rezeptoren und können zur Sekretion von Histamin und anderen Mediatoren aktiviert werden. Die Kultivierung von RBL-2H3-Zellen ist relativ einfach, und längere Kultivierungszeiten führen zu einer höheren Zelldichte.

Die Degranulation ist ein Hauptmerkmal der RBL-2H3-Zellen, ähnlich wie bei Mastzellen und Basophilen. Wenn Allergene ihre IgE-gebundenen FceRI-Rezeptoren vernetzen, setzen RBL-2H3-Zellen vorgebildete und neu synthetisierte Mediatoren frei und tragen so zur allergischen Immunantwort bei. Die Degranulation von RBL-2H3-Zellen hat auch Einblicke in die basophile Degranulation gegeben. Diese Zellen können auch als Reaktion auf nicht-immunologische Stimuli degranulieren, und es gibt Unterschiede zwischen MMC, RBL-2H3 und CTMC.
Die Rolle von Kalzium bei der Degranulation von RBL-2H3-Zellen ist bedeutsam. Der Kalziumionophor A23187, der den intrazellulären Kalziumspiegel erhöht, löst in RBL-2H3-Zellen eine Degranulation aus, ähnlich wie bei Mastzellen und Basophilen. Einige Studien haben RBL-2H3-Zellen als eine Serotonin freisetzende Zelllinie beschrieben.

Gewebe
Peripheres Blut
Krankheit
Leukämie bei Ratten
Synonyme
  • RBL2H3
  • RBL 2H3
  • RBL.2H3

02Klassifizierung

Organismus
Ratte
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Fibroblasten

04Bezeichner

Quellenangabe
RBL-2H3 (Cytion Katalognummer 305194)
NCBI-Steuer-ID
10116
Cellosaurus
CVCL_0591

05Handhabung und Kultur

Nährmedium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion-Artikelnummer 820100a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS und 1% NEAA
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

07Spender

Rasse / Unterart
Wistar